郑晓文，陈一强，孔晋亮，张剑锋，经庆玲

    目前，肺癌仍是癌症导致的死亡中的首要原因，是一种具有高转移潜能的高侵袭性恶性肿瘤，有很大一部分的肺癌明确诊断的时候已经处于晚期，错过最佳的治疗时机。异常激活的Hedgehog信号通路已经在很多肿瘤中发现，如基底细胞癌、胰腺癌、肝癌、前列腺癌、胃癌等[1-5]。Hedgehog信号通路有SHH、DHH、IHH 3个配体，其中最常见的是SHH，通过与ptch1结合，解除对SMO的抑制，启动Gli-1核转录，激活HH靶基因的转录。Hedgehog信号通路成分的异常高表达常与肿瘤增强的迁移和侵袭能力相关[6]。Hedgehog信号通路的靶基因常是生长因子或生长因子受体，包括胰岛素样生长因子2(IGF-2)、血管内皮生长因子(VEGF)和血小板衍生生长因子受体α(PDGFRα)[7]。本研究通过检测人肺癌组织中的Hedgehog信号通路主要成分SHH、Gli-1及靶基因VEGF的表达，分析其与不同临床病理特征的相关性。

    1 材料与方法

    1.1 临床资料 选取2013年3—10月广西医科大学第一附属医院临床病理明确诊断为肺癌，并行外科手术治疗的患者72例为研究对象，取癌组织及癌旁组织(距离癌组织5 cm)。其中男40例，女32例；年龄33～84岁，平均(57.7±13.1)岁；腺癌50例，鳞癌12例，小细胞癌4例，其他6例。有吸烟史36例，术前有化史4例。另选取同时期良性肺病变组织30例为对照组，其中男18例，女12例；年龄39～67岁，平均(45.8±10.3)岁；包括支气管扩张12例，肺结核球9例，肺炎性假瘤5例，肉芽肿性炎3例，肺气肿1例。本研究取得广西医科大学第一附属医院伦理审查委员会的审查批准。

    1.2 实验材料 RNA样品保存液(TIANGEN，DP408)；反转录试剂盒〔宝生物工程(大连)有限公司〕；定量PCR试剂盒(Roche)；SHH抗体(Santa Cruz，sc-1194)，Gli-1抗体(Santa Cruz，sc-20687)，VEGF单克隆抗体(Origene，TA500042)。

    1.3 实时荧光定量PCR引物序列 在美国国立生物技术信息中心(NCBI)基因库查到相应的基因序列，采用Oligo 5.0进行引物设计，然后在NCBI上进行Primer-BLAST，采用评分最高的引物序列。引物序列的合成由北京六合华大基因科技股份有限公司合成(见表1)。

    1.4 免疫组织化学法检测肺癌组织SHH、Gli-1、VEGF的表达 将取得的癌组织、癌旁组织、良性肺病变组织经甲醛溶液固定后 ......