边晓慧，何 平，孙广萍，孙 立，李德天，冯江敏

    骨髓间充质干细胞(MSC)的归巢是其在各种肾脏疾病中发挥作用的第一步。目前，大量证据表明，当特定的组织器官受损后，外源性的MSC能够优先定位于受损靶器官的受损部位，包括心[1]、脑[2]、肾[3]等，并且与MSC进入体内的方式无关。目前，对于MSC归巢的机制并不明确，假说认为在受损的部位某种特异性的化学趋化因子或细胞因子较正常组织明显升高，而MSC表达不同的黏附分子或趋化因子，其之间的相互作用促使MSC定向性地移动、黏附、定植于受损部位，从而发挥对靶器官的保护作用。透明质酸(HA)在很多肾脏疾病中都出现表达升高[4-6]，而其特异性配体是MSC的表面特异性受体CD44。Zhu等[7]在体外实验中发现HA能剂量依赖性地刺激MSC的迁移，Herrera等[4]在甘油诱导的急性肾衰竭模型中发现MSC的确能够迁移至HA表达明显的区域。所以目前提出了新的观点，即CD44和HA之间的相互作用可能是外源性MSC在体内归巢于受损肾脏的关键因素。本课题组前期实验已经发现在大鼠5/6肾切除后的第8周给予尾静脉注射MSC，不仅归巢的数量较多，而且能够修复受损的肾脏[8]。故本实验拟在该模型中进一步研究MSC的归巢是否也与CD44和HA之间的相互作用有关以及是否影响MSC修复肾脏的能力。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料 实验用细胞株：稳定转染绿色荧光蛋白的大鼠MSC/GFP购自赛业(广州)生物科技有限公司(RASMX-01101)。实验动物：成年健康清洁级雄性SD大鼠36只，体质量200～250 g，鼠龄7～8周，由中国医科大学附属盛京医院动物室提供。主要试剂：SD大鼠MSC基础培养基(RASMX-03011-440，广州赛业)，10% MSC专用胎牛血清(RASMX-05001-50，广州赛业)。兔抗大鼠透明质酸结合蛋白(HABP)多克隆抗体(lifespan，USA)；小鼠抗大鼠HABP单克隆抗体(Bio-World，USA)；小鼠抗大鼠α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)单克隆抗体(武汉博士德试剂有限公司)；兔抗大鼠CD68多克隆抗体(武汉博士德试剂有限公司)；抗CD44抗体(OX50，Becton Dickinson，San Jose，CA，USA)；小鼠抗绿色荧光蛋白标签单克隆抗体(Earth OX，LLC，San Francisco，CA，USA)。

    1.2 实验方法

    1.2.1 MSC的培养和CD44的表达 MSC/GFP在SD大鼠MSC基础培养基中，37 ℃ 5%CO2恒温箱中进行常规细胞培养 ......