王继慧，张小卿，马月丹，张 燚，马贤德，吴景东

    在整体、器官、细胞和基因、蛋白水平上找到可测量的异常，已成为中外医学的研究趋势[1]。皮肤光老化即因长期或急性大剂量受到日光照射所导致的皮肤损伤和衰老。皮肤衰老(包括光老化)现代机制可阐述为，细胞的遗传基因调控是根本，自由基的作用可能为内因，细胞代谢障碍是基础，环境因素包括光损伤为外因的衰老机制理论。细胞凋亡被认为是机体稳态维持和DNA损伤细胞清除的重要调节机制。细胞凋亡可调节皮肤发育，在维持皮肤生理稳态和避免肿瘤发生中起关键作用[2]。但是，细胞凋亡过多，会导致机体免疫力下降，容易激发感染，一些人类皮肤病就是以细胞凋亡的增加为特征[3]。长波紫外线(UVA)照射细胞后，首先在细胞内产生大量活性氧，成为皮肤光损伤的主要因素。过量的活性氧会导致细胞氧化应激并产生细胞凋亡转录因子，引起细胞凋亡[4]。研究认为，经紫外线辐射受损的细胞，如果其损伤修复率提高，凋亡率就明显下降[5]。

    杨靓[6]研究发现，绞股蓝可以显著影响细胞凋亡发生途径和结果，细胞凋亡与Caspase信号通路密切相关；绞股蓝总皂苷(Gyp)具有较强的清除自由基、抗氧化等作用[7]。提示绞股蓝对光老化皮肤细胞凋亡可能有保护性影响。人皮肤结构中，真皮内的成纤维细胞具有合成和分泌蛋白质并参与组织损伤后修复的功能。但关于绞股蓝对光老化人皮肤成纤维细胞(HSF细胞)凋亡影响的实验研究目前还十分少见。本实验通过观测Gyp含药血清对光老化HSF细胞凋亡及相关基因和蛋白的调控，通过探讨Caspase-3信号通路对细胞凋亡的调控作用，期望能揭示Gyp对光老化HSF细胞凋亡的保护性影响。本实验采用的永生化HSF细胞作为可在体外传代的永生化细胞无成瘤性，与正常HSF细胞分化特性高度相似，是研究HSF细胞的良好工具。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 选择雄性SPF级SD大鼠20只，体质量(200±20)g，购于中国医科大学，常规颗粒饲料喂养，自由饮水，12 h昼夜节律。

    1.2 实验试剂 HSF细胞购于上海艾研生物科技有限公司；Gyp购于成都曼斯特生物科技有限公司(批号：MUST-11031401)；细胞蛋白提取试剂(批号：P0013)、BCA法蛋白定量试剂盒(批号：P0012S)、ECL发光液(批号：P0018)购于碧云天生物科技有限公司。

    1.3 实验设备 电热恒温振荡器(SHA-B型)常州国华仪器设备厂生产；酶标仪(antho2010型)奥地利Anthos公司生产；凝胶成像分析系统(ChemiImager5500型)美国Alphainnotech Chemi Imager生产；水平摇床(WD-9405B型)北京六一仪器厂生产；垂直板电泳装置(Mini-Protein Ⅲ型)美国Bio-Rad公司生产；电泳仪(EPS300)上海天能科技有限公司生产；转印电泳槽(DYY 40B型)北京六一仪器厂生产；UBA(UV)光源(20 W)订制于南京华强电子有限公司；紫外光光度计(UV-340A型)台湾路昌电子仪器有限公司生产 ......