倪晓辰，陈砚凝，武新慧，张爱莉，赵志红

    膀胱癌是我国泌尿系统最常见的恶性肿瘤，近年来膀胱癌的发病率呈显著增加趋势。膀胱癌的治疗目前仍以手术治疗为主，但是由于膀胱癌术后极易复发，且复发后肿瘤具有向更高级别恶性程度发展的趋势，严重影响了患者的预后，为膀胱癌的临床治疗带来极大挑战，所以研究预防其复发的理想药物具有重大的临床意义。去甲氧基姜黄素(demethoxycurcumin,DMC)对人膀胱癌的作用尚不清楚。本研究观察了DMC对膀胱癌T24细胞增殖及凋亡的影响，并初步探讨了其诱导T24细胞凋亡的分子机制，为进一步研究DMC治疗膀胱癌提供了理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 细胞培养与药物准备 人膀胱癌T24细胞株用含10%胎牛血清(FBS)的RPMI-1640培养基培养，待细胞生长达90%融合后，用消化液〔含0.25%胰蛋白酶、0.02%乙二胺四乙酸(EDTA)、磷酸盐缓冲液(PBS)〕消化传代，至细胞生长达80%融合时进行实验。将DMC粉末充分溶解于二甲基亚砜(DMSO)中，制备成浓度为160 μM的储液，等分装10份后置于-20 ℃避光保存备用。将细胞分为实验组和对照组，实验组细胞加入不同浓度的DMC进行孵育，对照组加入等体积DMSO进行孵育。

    1.2 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)实验 将T24细胞用消化液消化，并吹打成单细胞悬液，并将约100 μl的细胞悬液(约1×104个细胞)接种于96孔板各孔中，贴壁后实验组分别加入不同浓度的DMC(10、20、40、80、160 μM)刺激48 h。对照组使用0.1%(体积比)的DMSO孵育相同时间。倒置显微镜观察后每孔加入20 μl MTT(5 mg/ml)溶液，并于37 ℃下孵育3 h，然后弃去培养液，每孔各加入DMSO 150 μl，混匀后于570 nm处比色测定。以上各组设6个复孔，重复3次。

    1.3 流式细胞学分析 将各组细胞用消化液彻底消化并吹打成单细胞悬液，1 000 r/min离心5 min,离心半径为16 cm ......