周 莹，刘 沛

    感染性休克是由病原微生物及其毒素或抗原-抗体复合物引起的以急性微循环障碍为主要表现的一组临床综合征。主要血流动力学改变包括低血压、低外周血管阻力、血管对收缩剂反应性下降、血流重新分布等[1]，是由肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha，TNF-α)、白介素1(IL-1)、血小板活化因子(PAF)、花生四烯酸代谢产物〔前列环素(PG)、白三烯(LT3)、血栓素A2(TXA2)〕、一氧化氮(NO)等多种因子共同作用的结果[2]。多项动物实验证实，TNF-α是引起感染性休克、多器官功能衰竭(MOF)的主要递质[3]。有证据表明TNF-α可通过多种途径间接参与心肌细胞、血管平滑肌细胞(VSMC)和支气管平滑肌细胞的收缩[4]。感染性休克中血流动力学的改变与血管的收缩、舒张能力变化有关，为了探讨TNF-α在感染性休克血管收缩性变化中的作用，本实验试图在器官及细胞水平上应用TNF-α预处理离体去内皮主动脉环，观察其在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用下的收缩反应，并分离培养VSMC，经TNF-α预处理后观察细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的变化，探讨TNF-α影响VSMC功能的机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料 雄性Wistar大鼠60只(中国医科大学实验动物中心)，体质量200～250 g；乙酰甲酯(Fluo-3/AM)、AngⅡ、乙酰胆碱(Sigma公司)；TNF-α(R&D公司)；2-氨基乙氧基联苯硼酸盐(2-APB，Merck公司)；兔抗α-肌动蛋白单克隆抗体、TRITC标记山羊抗兔IgG抗体(北京中山生物技术有限公司)；DMEM培养液、标准胎牛血清(Gibco公司)；25 cm2培养瓶、3.5 cm薄底平皿(Corning公司)；乙二醇二乙醚二胺四乙酸(EGTA)、TritonX-100、氯化钙(CaCl2)等化学试剂(中国医药集团上海化学试剂公司)。

    张力传导放大器(TB-611T，Nihon Kohden公司)；激光共聚焦显微镜及LSM510软件(德国Carl Zeiss公司)。实验时间为2012年3—6月，地点为中国医科大学中心实验室。

    1.2 方法

    1.2.1 离体主动脉环制备及反应性测定

    1.2.1.1 离体主动脉环制备 选取24只Wistar大鼠，采用45%乌拉坦和5%氯醛糖混合液1 ml腹腔注射使大鼠致死，开胸取胸主动脉置于通有95%氧气(O2)和5%二氧化碳(CO2)的Kreb液中，分离周围的脂肪和结缔组织后剪成数个长3～5 mm的主动脉环 ......