马 冬，杨艳艳，赵 力，金玉兰，王 洋，李 鸥

    宫颈癌患者机体内免疫微环境的变化已受到人们重视[1]，其中辅助性T细胞(T helper，Th)亚群Th1/Th2的变化在恶性肿瘤免疫逃逸中十分重要[2]。组织特异性DNA甲基化谱是基因组的一个显著特征，近年来研究表明，基因甲基化异常与宫颈癌变有关[3]，因此制定宫颈癌Th1、Th2相关细胞因子DNA甲基化谱对宫颈癌的早期诊断有重要意义。本研究通过检测宫颈癌患者宫颈组织中Th1/Th2型细胞因子干扰素γ(IFN-γ)和白介素10(IL-10)基因启动子区甲基化状态及转录活性，旨在探讨DNA甲基化与基因表达的关系及其在宫颈癌中的作用。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 选取2011年3月—2012年5月在唐山市工人医院住院部就诊的宫颈癌患者43例为宫颈癌组、宫颈上皮内瘤变(CIN)患者62例为CIN组，另选取同期行全子宫切除的子宫肌瘤患者43例为对照组。其中宫颈癌组年龄46～59岁，平均(49.8±5.2)岁；病理类型均为鳞癌，根据WHO标准分级，高分化鳞癌7例，中分化鳞癌23例，低分化鳞癌13例；根据FIGO(2000年)临床分期标准，I期27例，Ⅱ期13例，Ⅲ～Ⅳ期3例。CIN组年龄40～55岁，平均(48.6±5.1)岁；宫颈上皮内瘤变I期(CIN1)23例，宫颈上皮内瘤变Ⅱ/Ⅲ期(CIN2/3)39例。对照组年龄43～56岁，平均(50.6±5.2)岁。收集三组患者的宫颈组织标本，其中对照组标本来源于子宫肌瘤旁正常宫颈组织，CIN组和宫颈癌组标本分别来源于宫颈活检和手术治疗，均经病理检查确诊。取标本前患者均未行化疗、放疗或免疫治疗，收集后置于-80 ℃冰箱保存。

    1.2 方法

    1.2.1 DNA和总RNA提取 采用饱和酚-氯仿抽提法提取三组宫颈组织DNA，Trizol法提取总RNA，1%琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA和总RNA完整性。

    1.2.2 IL-10和IFN-γ基因启动子区甲基化检测 按照EZ DNA Methylation-GoldTMKit试剂盒说明书对DNA进行甲基化修饰及纯化。NCBI检索IL-10(AF418271)和IFN-γ(J00219)基因启动子区序列，Methyl Primer Express v1.0软件分析核对参考引物[4-5]，亚硫酸氢盐测序法(Bisulfite sequencing PCR ......