李 飞，蔺丽慧，王 娟，李 佳，彭 霞，肖 辉，刘亚楠，戴慧蓉，王玉萍，李 莉

    过敏性哮喘是一种以肺部嗜酸粒细胞浸润、黏液分泌增加和气道高反应性为特征的慢性气道性疾病，发病机制复杂，其中Ⅰ型超敏反应被认为是其主要机制，现已发现多种细胞参与此过程，如树突细胞、T细胞、B细胞以及肥大细胞[1]。树突细胞是来自骨髓的一群异质细胞，分布于大多数外周组织中。位于鼻、气管、支气管、肺泡和脏层胸膜在内的整个肺组织的树突细胞能主动捕获、加工处理外来抗原，并由主要组织相容性复合体Ⅱ类分子(MHCⅡ)完成抗原提呈，一旦其进入发育成熟阶段即失去这种捕获能力；与此同时进入成熟阶段的树突细胞在形态和功能方面发生巨大变化，其表面MHC、协同刺激分子和黏附分子表达增多，导致树突细胞激活T细胞的能力增强，进而引起免疫应答[2]。树突细胞作为目前已知的体内功能最强的专职抗原递呈细胞在此过程中占据关键地位[3]。

    此前对于哮喘的研究多集中在Th1/Th2平衡和肥大细胞脱颗粒等方面[4]，但对于树突细胞在过敏性哮喘发病中所发挥的作用却少有报道。有研究表明哮喘患者外周血中树突细胞的比例和绝对数量均有不同程度的升高[5]。本实验拟通过尾静脉注射树突细胞,然后致敏和激发，观察小鼠的生命状态、脾脏的增生情况、肺泡灌洗液中的组胺水平、肺组织炎性反应情况，进一步揭示树突细胞在哮喘发病中发挥的作用，为哮喘的预防和治疗提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物、试剂及仪器 雄性BALB/c(H-2d)小鼠30只，6～8周龄，体质量20～25 g，购自上海必凯实验动物中心,饲养在SPF级实验动物饲养设施中。RPMI 1640全培养液〔含RPMI 1640培养基(GIBCO公司)、10%胎牛血清(GIBCO公司)、100 U/ml青霉素、100 U/ml链霉素及50 μmol/L 2-巯基乙醇(Amerco公司)〕。红细胞裂解液由本室配制。重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)及重组白介素4(rmIL-4，Peprotech公司)，脂多糖(LPS)和二甲基亚砜(DMSO，Sigma公司)，CCK-8试剂盒(Cell Counting Kit-8，Dojindo公司)。荧光抗体:抗小鼠CD11c抗体，抗小鼠MHC Ⅱ抗体，抗小鼠CD86抗体(Biolegend公司)。流式细胞仪FC500(Beckman Coulter公司)，倒置显微镜(Olympus公司)。恒温培养箱(SANYO MCO-175)，酶标仪(Thermo MK-3)。 ......