廖运学，王昌明，蒋 明，马礼兵，徐 青，陈 峰，吕 倩

    血管性疾病逐渐成为国内外研究的热点，血管平滑肌细胞(VSMCs) 的增殖和迁移是血管性疾病的重要病理改变[1]。慢性阻塞性肺疾病(COPD)的全身、局部炎症及缺氧等因素均可导致肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)的增殖、凋亡及合成分泌功能改变，是COPD继发肺动脉高压的主要机制[2]。研究表明，肺动脉高压发生的主要部位在远端肺动脉[3]。目前原代培养大鼠 PASMCs的方法报道较多，国内也有相关大鼠 PASMCs原代培养及生物学特性与功能研究的报道[4-5]，但关于原代培养COPD模型大鼠远端 PASMCs及其功能的研究报道较少。本研究通过建立COPD大鼠模型，采用组织块贴壁法培养大鼠原代远端 PASMCs，探讨COPD大鼠与正常大鼠远端PASMCs生物学特性及功能的异同，为COPD继发肺动脉高压发病机制及药物防治研究提供更具有代表性的实验研究对象及研究数据。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 SPF级健康雄性SD大鼠12只，8周龄,体质量(300±20)g，购自桂林医学院动物实验中心。

    1.2 实验试剂 DMEM/F12培养基(GIBCO 公司 10×1 L)、胎牛血清(美国GIBCO)、0.25% 胰蛋白酶-乙二胺四乙酸(EDTA)消化液均为Hyclone公司细胞培养产品、青霉素-链霉素溶液(100×青-链霉素，含10 mU/L青霉素+10 g/L链霉素) 和 D′-Hanks 缓冲液(GIBCO)，二甲基亚砜(DMSO)购于Sigma公司，翻盖红色金牌黄果树香烟(贵阳卷烟厂，焦油量15 mg，烟气烟碱量1.2 mg)，戊巴比妥钠注射液、75%乙醇用双蒸水(ddH2O)配制、经表面改性处理的25 cm2一次性细胞培养瓶；小鼠抗大鼠α- 平滑肌肌动蛋白抗体(美国abcam)、山羊抗小鼠 IgG(美国Earthox)，即用型链霉亲和素-生物素复合物(SABC)免疫组化染色试剂盒、二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒及磷酸盐缓冲液(PBS)均购于武汉博士德生物工程有限公司。CFDA SE细胞增殖与示踪检测试剂盒(碧云天生物技术研究所)、CCK-8试剂盒(碧云天生物技术研究所)。

    1.3 实验仪器 二氧化碳(CO2)培养箱(德国，Hereus)，倒置相差显微镜(日本，OLYMPUS)，荧光显微镜(日本，Olympus)，流式细胞仪(BD FACSAria Ш) ......