戚 迪，何 婧，叶 媛，冯龙华，王导新

    非心源性肺水肿造成的氧合功能障碍是导致急性呼吸窘迫综合征(ARDS)顽固性低氧血症的特异性原因，因此，如何维持有效肺泡水肿液清除(alveolar fluid clearance,AFC)是改善气体交换、提高血氧饱和度、降低病死率的关键[1-2]。肺泡上皮钠通道(epithelial sodium channel,ENaC)是由α、β、γ亚基组成三聚体,作为肺泡上皮钠水转运的限速环节，在ARDS所致肺水肿的发生发展中扮演重要的角色,其调控机制及通路的研究具有重要价值[3-4]。多项研究表明，17β-雌二醇作为一种重要的类固醇激素可通过多方面作用改善ARDS[5-10]。β-雌二醇对于ENaC的经典调节机制是通过17β-雌二醇受体反应元件(estrogen relative element,ERE)介导的基因转录调节，但近年来，其通过快速激活细胞内信号通路介导的非基因转录后调节机制引起关注[11-12]。众所周知ENaC的活化及表达受AGC激酶家族(protein kinase A/protein kinase G/protein kinase C)的调节，其中SGK1(serum-glucocorticoid-induced kinase 1)作为一种重要的AGC激酶，在调控离子液体转运中扮演重要角色[13-15]。磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)及其直接靶蛋白——蛋白激酶B(protein kinase B，PKB/AKT) 是机体应对损伤的一条重要的内源性负反馈通路，且与ARDS发生发展关系密切[16-19]。但17β-雌二醇通过该通路对ENaC的调节作用研究甚少。本研究旨在通过建立ARDS小鼠模型，观察17β-雌二醇介导的PI3K/AKT/SGK1信号通路对ARDS ENaC的调控作用及机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 SPF级雄性C57B/L6小鼠40只，5～8周龄，体质量(20±5) g〔重庆医科大学动物实验中心提供，许可证号:SCXK(渝) 2012-0001〕，普通光照环境下饲养，自由饮水与摄食喂养。

    1.2 实验材料 脂多糖(LPS,E.coli,O111:B4)、渥曼青霉素及17β-雌二醇购于Sigma公司；髓过氧化物酶(MPO) 检测试剂盒购于南京建成工程生物研究所；总RNA 提取试剂盒、cDNA合成试剂盒、反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)试剂盒、DNA marker DL1000 购于宝生物工程(大连)有限公司；RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)及BCA蛋白浓度测定试剂盒购于碧云天生物技术研究所；酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒购于北京四正柏生物科技有限公司；β-肌动蛋白(β-actin)、α-、β-、γ-ENaC单克隆抗体购于Abcam 公司；磷酸化AKT(p-AKT ......