史从宁，王雅杰，赵运转，康熙雄

    在世界范围内,缺血性卒中是主要的致死性疾病，其在青年人(15～45岁)中的发病率为3%～5%[1-2]。近年来有一些针对青年缺血性卒中发生机制的研究，凝血因子Ⅴ的Leiden突变、亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T的多态性均被认为可能与青年缺血性卒中的发生相关[3-4]。内皮细胞一氧化氮合酶能生成一氧化氮，一氧化氮在血管动态调节方面起重要作用。一氧化氮是强血管扩张剂并能抑制血小板的聚集[5-6]。有试验表明，一氧化氮依赖的血管扩张活性受损在缺血性卒中的发生中起重要作用[7-8]。尽管做过一些研究，一氧化氮合酶的基因多态性和缺血性卒中的相关性仍不确定，尤其早发性缺血性卒中研究更少，一氧化氮合酶基因多态性和青年缺血性卒中的关系值得研究。本研究检测一氧化氮合酶内含子4(eNOS4)、MTHFR C677T、凝血因子Ⅴ G1691A的多态性，探讨其与青年缺血性卒中的相关性。

    1 资料与方法

    1.1 临床资料 选取2011年4月—2012年7月首都医科大学附属北京天坛医院收治的青年缺血性卒中患者97例为研究组，其中男79例，女18例；年龄20～45岁。患者突然发病，迅速出现局限性神经功能缺失症状并持续24 h以上，神经症状和体征可以用某一血管综合征解释，颅脑CT或MRI发现梗死灶，梗死灶位于某一脑血管支配区域，排除脑出血、炎症性疾病等，即可确诊缺血性卒中。另同时期遵循年龄、性别频数匹配的原则，选择来自骨外科、普外科、消化内科、呼吸内科等其他科室的非缺血性卒中住院患者99例为对照组，排除心脑血管疾病，其中男80例，女19例；年龄21～45岁。入组患者均经过全面系统的检查，有详细的病史和个人史资料。

    1.2 临床资料收集 收集患者性别、年龄、高血压、糖尿病、吸烟、饮酒情况，检测胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)水平、eNOS4、MTHFR C677T、凝血因子Ⅴ G1691A基因的多态性。

    1.3 主要试剂和方法 基因组DNA提取试剂盒购自OMEGA公司；Taq酶、dNTP、20 bp DNA marker、50 bp DNA marker、DL 2000 DNA marker内切酶Hinf I均购自宝生物工程(大连)有限公司；内切酶Mnl I购自NEB公司，引物由上海英骏公司合成；无水乙醇、冰乙酸、乙二胺四乙酸(EDTA)购自北京化学试剂公司；琼脂糖购自genetech公司；Tris碱购自索莱宝公司。

    基因组DNA提取严格按照说明书操作 ......