蔡 伟，徐积兄，张 微，朱伟锋，朱凌燕，刘 盈，肖钧仁，刘建英

    许多研究表明，晚期糖化终产物受体(RAGE)对糖尿病慢性并发症起着重要作用[1-3]。RAGE是一个多配体的细胞表面分子，属于免疫球蛋白超家族。RAGE广泛分布于血管内皮细胞、单核巨噬细胞、肾小球系膜细胞、神经胶质细胞等。而且，RAGE表达水平受高血糖等环境的影响，尤其是长期高血糖所致大量晚期糖化终产物(AGEs)存在的条件下，RAGE呈高水平表达[1]。RAGE通过与其配体AGEs等相互作用，参与了糖尿病血管病变的发生与发展过程[2-3]。本研究的前期研究及其他研究均发现，RAGE基因-429T/C多态性与中国汉族人糖尿病血管并发症包括缺血性心脏病和肾病相关[4-5]。因而推测-429T/C多态性可能通过改变RAGE基因表达，从而影响RAGE在糖尿病血管并发症中的作用。因此，本研究拟通过检测不同基因型的糖耐量正常人外周血单核细胞(PBMC)RAGE的mRNA和蛋白表达水平，以初步了解RAGE基因-429T/C多态性对基因表达功能的影响。

    1 资料与方法

    1.1 临床资料 2012年8—12月在江西南昌地区糖尿病流行病学调查人群中，选取70名糖耐量正常的汉族人群作为研究对象，均经口服葡萄糖耐量试验(OGTT)筛查为糖耐量正常，排除糖尿病病史、高血压病史、脂质代谢紊乱史，无糖尿病家族史，而且血压、血脂和肝肾功能均正常。最终匹配选取TT基因型组11名和TC基因型组11名。两组性别、年龄、体质指数、血压、空腹血糖、餐后2 h血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)水平比较，差异均无统计学意义(P>0.05，见表1)。本研究通过了南昌大学第一附属医院医学研究伦理委员会审查批准，并取得了受试者的知情同意。

    1.2 材料 DNA提取试剂盒购自北京百泰克生物技术有限公司，人单核细胞分离液购自TBD公司，总RNA提取试剂盒购自Transgen公司，兔抗人RAGE抗体和羊抗兔-HRP购自Santa Cruz公司，随机引物和反转录酶购自美国Promega公司。

    1.3 试验方法

    1.3.1 PBMC提取与分离 抽取早晨空腹外周静脉血2 ml，按1∶1体积加入Hank′s液混匀后，小心缓慢地在其液面上加入2 ml细胞分离液，以2 000 r/min(离心半径145 mm)离心15 min，收集液界面上的细胞，放入含Hank′s液5 ml的试管中充分混匀后，以2 000 r/min(离心半径145 mm)离心10 min ......