李赛男，祁文瑾

    白假丝酵母菌最优化RNA提取策略的探索

    李赛男，祁文瑾

    目的 探索白假丝酵母菌总RNA简单、快捷、高效的提取方法。方法 选取昆明医科大学第一附属医院妇产科门诊2011年7月—2013年3月有临床症状且阴道分泌物镜检阳性的外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)患者的白假丝酵母菌40株，选用不同时间与温度组合下的4种溶壁酶(Lyticase)破壁方案(A方案：37℃、12 h，B方案：25℃、12 h，C方案：37℃、24 h，D方案：25℃、24 h)进行RNA提取，将所得RNA进行荧光定量PCR(qPCR)反应验证RNA的浓度及纯度，并进行管家基因18S rRNA的检测。结果 D方案提取获得的RNA浓度高于A、B、C方案(P<0.05)；B方案提取获得的RNA浓度高于A、C方案(P<0.05)；而A、C两方案提取获得的RNA浓度比较，差异无统计学意义 (P>0.05)。B、D方案获得的RNA纯度高于A、C方案 (P<0.05)；但A、C方案获得的RNA纯度比较，差异无统计学意义(P>0.05)；B方案提取获得的RNA纯度高于D方案(P<0.05)。A、B、C、D方案提取的RNA扩增产物Ct转化值比较，差异有统计学意义(P<0.05)；其中B、D方案qPCR扩增产物Ct转化值高于A、C方案(P<0.05)；但B、D方案及A、C方案之间的 qPCR扩增产物Ct转化值比较，差异无统计学意义(P>0.05)。管家基因18S rRNA的引物扩增出的产物片段大小为150 bp。结论 以Lyticase破壁提取白假丝酵母菌具有简单易行及RNA产量高、纯度好的优点，值得临床推广应用。

    白假丝酵母菌；RNA；聚合酶链反应；溶壁酶

    李赛男，祁文瑾.白假丝酵母菌最优化RNA提取策略的探索[J].中国全科医学，2015，18(2)：176-179. [www.chinagp.net]

    Li SN，Qi WJ.Strategy of optimizing RNA extraction from candida albicans[J].Chinese General Practice，2015，18 (2)：176-179.

    外阴阴道假丝酵母菌病 (vulvovaginal candidisis，VVC)是常见的外阴阴道感染性疾病，是由假丝酵母菌感染引起的阴道黏膜和/或外阴真菌感染。对假丝酵母菌分子生物学水平的研究常需提取其总 RNA，由于假丝酵母菌细胞壁主要是由几丁质组成，壁厚且坚硬，破壁一直是假丝酵母菌总RNA提取的关键步骤 ......