石仁芳，吴继周，万裴琦，吴健林，宁秋悦，庞 裕

    ·论著·

    广西肝癌高发区乙型肝炎病毒基本核心启动子区A1762T/G1764A双突变对肝癌家族聚集的影响

    石仁芳，吴继周，万裴琦，吴健林，宁秋悦，庞 裕

    目的 探讨广西肝癌高发区乙型肝炎病毒(HBV)基因组基本核心启动子(BCP)区A1762T/G1764A双突变对肝癌家族聚集的影响。方法 收集2007年7月—2012年7月广西肝癌高发区39个肝癌高发家族中103例成员作为试验组，在相同地区59个无癌家族中选择与试验组年龄、性别、生活环境匹配的103例成员作为对照组，将试验组按家族患肝癌例数分为2～3例亚组(45例)和≥4例亚组(58例)；按亲属分级分为一级亲属组(48例)，二级亲属组(32例)，三级及以上亲属组(23例)。提取所有研究对象HBV DNA，PCR扩增并测序检测BCP区A1762T/G1764A双突变情况。结果 试验组A1762T/G1764A双突变率高于对照组 〔χ2=12.518，P1 资料与方法

    1.1 一般资料 收集2007年7月—2012年7月广西肝癌高发区39个肝癌高发家族中103例成员作为试验组，其中男65例，女38例；平均年龄(32.7±12.1)岁；在相同地区59个无癌家族中选择与试验组年龄、性别、生活环境匹配的103例成员作为对照组，其中男65例，女38例；平均年龄(32.8±12.7)岁。研究对象均为乙肝表面抗原(HBsAg)阳性并排除甲、丙、戊肝抗体阳性。家族中曾发生过≥2例肝癌患者的视为肝癌高发家族，最早确诊为肝癌者为先证者，诊断标准为《原发性肝癌临床诊断与分期标准》[4]；家族中未曾发生恶性肿瘤的视为无癌对照家族。在高发家族中，个体成员与先证者遗传物质间经历一次减数分裂定义为一级亲属(如父母、同胞、子女)，个体与先证者遗传物质间经历二次减数分裂定义为二级亲属(如舅、姨、伯、叔等)；依次类推定义为三级及以上亲属[5]。将试验组按家族患肝癌例数分为2～3例亚组(45例)和≥4例亚组(58例)；按亲属分级分为一级亲属亚组(48例)，二级亲属亚组(32例)，三级及以上亲属亚组(23例)。所有研究对象签署知情同意书。

    1.2 仪器与试剂 Thermo MDF-V4086S 超低温冰箱；Thermo多用台式离心机；HH-42数显恒温搅拌循环水箱及IW-A微量振荡器；ABI Veriti TM 多重控温PCR仪；PJ23L-SC1微波炉及JA1003电子天平；DYY-6C电泳仪及DYCP-31DN电泳槽；血清病毒QIAamp MinElute Virus Spin DNA提取试剂盒(德国QIAGEN公司)；PCR Premix Taq缓冲液、1 000 bp DNA Marker(对照)、RNase-Free水；琼脂糖 ......