白亚玲，徐金升，靳晶晶，张俊霞，张胜雷，崔立文，张慧然

    ·论著·

    镁离子对大鼠血管平滑肌细胞钙化相关因子表达的影响

    白亚玲，徐金升，靳晶晶，张俊霞，张胜雷，崔立文，张慧然

    目的 探讨镁离子对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化相关因子表达水平的影响。方法 选择5周龄健康雄性SD大鼠6只。以组织贴壁法进行原代VSMCs培养，至3～5代时用于细胞实验。将VSMCs采用随机数字表法分为正常对照组、高磷组(加入10 mmol/L β-甘油磷酸)、镁干预组〔加入10 mmol/L β-甘油磷酸+3 mmol/L硫酸镁(MgSO4)〕、2-氨基乙氧基二苯基硼酸(2-APB)干预组(10 mmol/L β-甘油磷酸+3 mmol/L MgSO4+10-4μmol/L 2-APB)。采用邻甲酚酞络合酮比色法检测细胞培养14 d后钙化情况，酶联免疫吸附法检测细胞培养14 d后碱性磷酸酶(ALP)活性，反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测0、3、6、10、14 d时细胞内基质G蛋白(MGP)mRNA和骨桥蛋白(OPN)mRNA的表达水平。结果 细胞培养14 d后，4组钙水平比较，差异有统计学意义(F=409.800，P1 材料与方法

    1.1 材料来源 选择5周龄健康雄性SD大鼠6只，体质量80～100 g，购自河北医科大学实验动物中心。

    1.2 主要试剂及仪器 胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)购自美国Hyclone公司,DMEM培养基(dulbecco′s modified eagle′s medium)购自美国GIBCO公司，兔抗鼠平滑肌肌动蛋白单克隆抗体购自北京博奥森生物有限公司，免疫组化试剂盒购自上海博海生物有限公司，β-甘油磷酸及2-氨基乙氧基二苯基硼酸酯(2-APB)购自美国Sigma 公司，碱性磷酸酶(ALP)活性试剂盒购自南京建成生物工程研究所，反转录聚合酶链反应(RT-PCR)试剂盒购自美国Fermentas公司，PCR引物由上海捷瑞生物工程有限公司合成，钙测定试剂盒购自中生北控生物科技股份有限公司，二喹啉甲酸(bicinchoninicacid,BCA)蛋白定量试剂盒购自北京索莱宝科技有限公司；倒置相差显微镜购自日本Olympus公司，细胞培养箱购自美国Sheldon公司,RT-PCR仪购自美国Abi公司。

    1.3 方法

    1.3.1 原代VSMCs培养及鉴定 以组织贴壁法进行原代VSMCs培养。原代VSMCs形态学观察：应用倒置相差显微镜观察细胞大小、形态、生长特点及排列方式等 ......