叶 瑾，司 瑞，郝启萌，付志诚，张荣庆，郭文怡

    ·论著·

    胰岛素通过Akt/FoxO/SVV信号通路抑制缺血再灌注损伤诱导心肌微血管内皮细胞凋亡的作用研究

    叶 瑾，司 瑞，郝启萌，付志诚，张荣庆，郭文怡

    目的 探讨胰岛素(INS)在抑制缺血再灌注损伤(IRI)诱导的心肌微血管内皮细胞(CMECs)凋亡中的作用及其分子机制。方法 分离和培养大鼠CMECs，建立模拟缺血再灌注(SI/R)模型，分别选用INS、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)特异性抑制剂渥曼青霉素(Wort)和FoxO1/3a干扰RNA处理细胞。采用随机数字表法对大鼠CMECs进行分组：SI/R组(5只大鼠的CMECs)，SI/R+INS组(5只大鼠的CMECs)，SI/R+INS+Wort组(5只大鼠的CMECs)，SI/R+INS+FoxO1siRNA组(6只大鼠的CMECs)，SI/R+INS+FoxO3asiRNA组(4只大鼠的CMECs)。采用末端转移酶标记技术(TUNEL)检测各组CMECs凋亡率，ELISA法检测各组Caspase-3活性，Western blotting法检测各组p-Akt(Ser473)、p-FoxO1(Ser256)、p-FoxO3a(Thr32)、生存素(SVV)蛋白表达水平。结果 与SI/R组比较，SI/R+INS组、SI/R+INS+FoxO1siRNA组、SI/R+INS+FoxO3asiRNA组CMECs凋亡率及Caspase-3活性均降低(P0.05)；与SI/R+INS组比较，SI/R+INS+FoxO1siRNA组、SI/R+INS+FoxO3asiRNA组CMECs凋亡率及Caspase-3活性升高(P1 材料与方法

    1.1 实验动物和材料 清洁级健康雄性SD大鼠25只，体质量150～200 g，由第四军医大学动物实验中心提供。胎牛血清、DMEM低糖培养基购自北京索莱宝科技有限公司。末端转移酶标记技术(terminal dexynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling，TUNEL)试剂盒购自Roche公司。磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)抑制剂渥曼青霉素(Wort，100 nmol/L)抗体购自Abcam公司。INS、Akt、p-Akt(Ser473)、FoxO1、p-FoxO1(Ser256)、FoxO3a、p-FoxO3a(Thr32)及SVV抗体均购自Cell Signaling公司 ......