朱晋坤，毛 华，尹扬光，董 文，杜 峰，鲁玉明，熊宗华，邓梦扬

    ·论著·

    血小板源性生长因子和血小板源性内皮细胞生长因子在内皮细胞和血管平滑肌细胞中的作用研究

    朱晋坤，毛 华，尹扬光，董 文，杜 峰，鲁玉明，熊宗华，邓梦扬

    目的 通过体外转染血小板源性生长因子(PDGF)和血小板源性内皮细胞生长因子(PD-ECGF)质粒，观察两种生长因子对人脐静脉内皮细胞EAHY926和主动脉血管平滑肌细胞T/G HA-VSMC的影响，评估两种生长因子对血管损伤治疗的可行性。方法 构建人pcDNA 3.1(+)空载(空载组)、pcDNA 3.1(+)-PDGF-透明质酸(HA) (PPH组) 和pcDNA 3.1(+)-PD-ECGF-HA (PPEH组)质粒，分别转染入EAHY926和T/G HA-VSMC中，四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测内源性PD-ECGF和外源性PD-ECGF对EAHY926和T/G HA-VSMC细胞增殖的影响；细胞伤痕实验观察内源性PD-ECGF和外源性PD-ECGF对EAHY926和T/G HA-VSMC细胞迁移速度的影响。结果 MTT法检测3组EAHY926吸光度值比较，差异有统计学意义(F=235.18，P0.05)。MTT法检测3组T/G HA-VSMC吸光度值比较，差异有统计学意义(F=82.89，P1 材料与方法

    1.1 质粒构建 pcDNA 3.1(+)-透明质酸(HA)由第三军医大学公共实验平台留存，本载体在多克隆位点后引入了HA标签(氨基酸序列为：YPYDVPDYA)，可以与目的蛋白融合表达以标记目的蛋白。合成PDGF和PD-ECGF引物。PDGF上游引物:5′-CCGGAATTCATGAATCGCTGCTGGGCGC-3′,下游引物:5′-ACCCAAGCTTGGCTCCAAGGGTCTCCTT-3′；PD-ECGF上游引物:5′-CCGGAATTCATGGCAGCCTTGATGAC-3′，下游引物:5′-ACCCAAGCTTTTGCTGCGGCGGCAGAACG-3′。采用聚合酶链式反应(PCR)从cDNA中富集PDGF和PD-ECGF全长。电泳纯化后采用限制性内切酶HindⅢ和EcoRⅠ进行酶切，以表达载体pcDNA 3.1(+)为骨架，重组连接为pcDNA 3.1(+)-PDGF-HA(PPH)和pcDNA 3.1(+)-PD-ECGF-HA(PPEH)质粒。

    1.2 细胞培养 EAHY926和T/G HA-VSMC购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库 ......