徐 慧，戴元荣，付玉茹，夏梦玲

    ·论著·

    磷脂酰肌醇3激酶和细胞外调节蛋白激酶信号通路对支气管哮喘大鼠气管平滑肌细胞增殖的协同调控作用

    徐 慧，戴元荣，付玉茹，夏梦玲

    目的 探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路对支气管哮喘(简称哮喘)大鼠气管平滑肌细胞(ASMC)增殖的协同调控作用。方法 6～8周龄SPF级雄性SD 大鼠，复制大鼠慢性哮喘模型，离体培养大鼠气管ASMC，将细胞分为正常组、哮喘组、转化生长因子β1(TGF-β1)组、TGF-β1+PD98059组、TGF-β1+渥曼青霉素(wortmannin)组、TGF-β1+PD98059+wortmannin组。采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况及Western blotting法检测磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)表达情况。结果 CCK-8法检测各组大鼠ASMC OD 值，TGF-β1组高于正常组和哮喘组，TGF-β1+ PD98059组、TGF-β1+wortmannin组和TGF-β1+PD98059+wortmannin组低于TGF-β1组，TGF-β1+ PD98059+wortmannin组低于TGF-β1+ PD98059组和TGF-β1+wortmannin组(P1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物 6～8周龄SPF级雄性SD大鼠30只，体质量100～120 g，购自上海实验动物中心〔合格证号：SYXK(浙)2010-0150〕。饲养于温州医科大学实验动物中心SPF级实验室，饲养温度25 ℃，相对湿度70%，昼夜照明12 h/12 h。

    1.1.2 主要试剂及仪器 兔多克隆抗磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)抗体购自美国CST公司，磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)抗体(美国abcam公司)，TGF-β1购自美国PeproTech公司，25 cm2无菌培养瓶购自美国Corning公司，RPMI 1640培养基购自美国HyClone公司，Ⅰ型胶原酶购自美国Sigma公司，优级胎牛血清(FBS)购自杭州四季青生物工程材料有限公司，青链霉素和胰酶细胞消化液购自江苏碧云天生物工程有限公司，5%CO2培养箱购自美国Thermo公司，倒置显微镜购自日本尼康公司，ECL试剂盒购自Gene 公司，甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)抗体、异硫氰酸荧光素(FITC)标记的山羊抗小鼠的二抗购自江苏碧云天生物工程有限公司 ......