霍 倩，杨德林，杨定芳，颜汝平，王海峰，韦海荣，丁祥黎，唐钊然

    血管紧张素抑制剂缬沙坦对膀胱癌细胞表达的影响

    霍 倩，杨德林，杨定芳，颜汝平，王海峰，韦海荣，丁祥黎，唐钊然

    目的 探讨缬沙坦对不同侵袭能力的膀胱癌细胞株血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ) 1型受体(AT1R)抗原、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的影响。方法 对三株不同侵袭能力的细胞株EJ-M3、EJ、BIU-87进行培养，使用10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9mol/L缬沙坦的1640培养液作用于细胞株，采用细胞生长状态测定法检测细胞增殖状况，确定最终药物浓度。根据细胞株不同分为EJ-M3组、EJ组、BIU-87组，每组细胞分为实验亚组和对照亚组，实验亚组加入含有10-3mol/L缬沙坦的RPMI-1640培养液，对照亚组仅加入无血清RPMI-1640培养液，培养48 h后抽提相应蛋白和mRNA。采用Western blotting法测定AT1R、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平，采用RT-PCR法检测AT1R、MMP-2和MMP-9基因的相对表达。采用细胞划痕实验、Transwell体外细胞侵袭实验检测3种膀胱癌细胞株的迁移能力和侵袭能力的改变。结果 依据MTT实验测定出的生长曲线选择浓度为10-3mol/L的缬沙坦作为最终药物浓度。Western blotting电泳结果显示，AT1R、MMP-2、MMP-9在3个细胞株中均有表达，但均较对照亚组表达明显降低。3组细胞株对照亚组AT1R、MMP-2、MMP-9 mRNA相对表达均高于实验亚组(P1 材料与方法

    1.1 材料 膀胱癌细胞株高侵袭力亚系EJ-M3(由前期实验筛选获取)，膀胱癌细胞株EJ细胞(由北京大学泌尿外科研究所余莉章教授惠赠)，膀胱癌细胞株BIU-87(购自中国科学院昆明动物所细胞室)，RPMI-1640培养液、胰蛋白酶(美国Gibco公司)，胎牛血清(上海依科赛生物工程有限公司)，鼠抗人AT1R、MMP-2、MMP-9单克隆抗体(美国Santa Cruz公司)，辣根过氧化酶(HRP)标记的羊抗鼠二抗(美国Santa Cruz公司)，内参抗体β-tubulin(北京博奥森生物技术有限公司)，Trizol、M-MLV第一链合成试剂盒(美国Invitrogen公司)，SYBR?Green Realtime PCR Master Mix(上海TOYOBO公司)，Western blotting配胶、电泳及转膜液试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司) ......