尹素改,王慧慧，吴耀松，陈玉龙

    启膈散乙酸乙酯提取物对食管癌Eca9706细胞增殖和凋亡的影响

    尹素改,王慧慧，吴耀松，陈玉龙

    目的 探讨启膈散乙酸乙酯提取物对食管癌Eca9706细胞增殖和凋亡的影响。方法 按沙参∶丹参∶茯苓∶川贝母(去心)∶郁金∶砂仁壳∶杵头糠=6∶6∶2∶3∶1∶1∶1的比例配制启膈散，每克药物配10 ml的比例加入95%乙醇溶液，用旋转蒸发仪浓缩药液，浓缩液与乙酸乙酯按体积比2∶1进行萃取，获取启膈散乙酸乙酯提取物。Eca9706细胞与浓度分别为12.5、25.0、50.0、100.0、200.0 μg/ml的启膈散提取物共培养，MTT法检测启膈散提取物对Eca9706细胞的抑制率。Eca9706细胞与35%抑制浓度(IC35)、50%抑制浓度(IC50)和70%抑制浓度(IC70)的启膈散提取物共培养，采用流式细胞仪检测启膈散提物对Eca9706细胞的凋亡率。结果 不同浓度启膈散提取物对Eca9706细胞的抑制率比较，差异有统计学意义(P1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 药物 启膈散参照《医学心悟》组方，药物组成与比例为沙参∶丹参∶茯苓∶川贝母(去心)∶郁金∶砂仁壳∶杵头糠=6∶6∶2∶3∶1∶1∶1；药材均购自北京同仁堂(集团)有限责任公司，并经河南中医学院苗艳艳副研究员鉴定为真品。

    1.1.2 细胞及试剂 人食管癌细胞株Eca9706细胞为河南中医学院分子生物实验中心保存；MTT和胰酶购自索莱宝生物科技有限公司，批号：20131113；RPMI 1640培养基购自索来宝生物科技有限公司，批号：20131012；胎牛血清购自杭州四季青生物工程材料有限公司，批号：121005；Annexin V-FITC /PI Apoptosis Detection Kits 购自南京凯基生物科技发展有限公司，凋亡试剂盒批号：20131226。

    1.1.3 仪器 细胞培养箱(德国Heraeus)，倒置显微镜(德国Carl Zeiss Jena)，BioMate紫外线分光光度计(美国Thermo Scientific)，SG-603生物安全柜(美国Bake)，ELx800型酶标仪(美国BIO-TEK)，FV1000S-LX81激光共聚焦显微镜(日本Olympus)。

    1.2 方法

    1.2.1 药物提取 按上述比例称取药物，以每克药物配10 ml的比例加入95%乙醇溶液浸泡7 d，震荡2次/d，混匀。用旋转蒸发仪浓缩药液，浓缩液与乙酸乙酯按体积比为2∶1进行萃取 ......