张 权，周 泉，何 艳，龚国忠，郑煜煌，周华英，黄 娜

    RNA干扰作用于HIV-1vpr基因的筛选实验研究

    张 权，周 泉，何 艳，龚国忠，郑煜煌，周华英，黄 娜

    目的 筛选鉴定针对HlV-1vpr基因的小干扰RNA(siRNA)片段。方法 根据siRNA设计要求合成siRNA56、siRNA160和siRNA185寡核苷酸片段，分别转染至含HIV-1vpr质粒的HEK 293T细胞，并进行总RNA提取，采用Real-time PCR和Western blotting分别从核酸和蛋白水平对HIV-1vpr基因表达水平进行验证。结果 siRNAs成功转染含HIV-1vpr质粒的HEK 293T细胞，降低了HIV-1vpr基因的表达水平，其中在RNA水平siRNA160组干扰抑制作用最强，抑制率为89%；在蛋白水平siRNA56组干扰抑制作用最强，抑制率为96%。结论 3个基因片段的siRNA均可以下调HIV-1vpr的表达水平，但存在差异性，为探索HIV/AIDS基因治疗的可行性和高效性提供了可靠的实验依据。

    RNA干扰；HIV-1；HIV-1vpr基因；HEK293T细胞

    张权，周泉，何艳，等.RNA干扰作用于HIV-1vpr基因的筛选实验研究[J].中国全科医学，2015，18(14)：1671-1674.[www.chinagp.net]

    Zhang Q，Zhou Q，He Y，et al.Screen and identify RNA interference on HIV-1vpr gene[J].Chinese General Practice，2015，18(14)：1671-1674.

    目前HIV感染者/AIDS患者的主要治疗手段仍是高效抗反转录病毒疗法 (HAART)，即通过不同的药物联合抑制HIV感染者体内的病毒载量，改善免疫重建，减少和延缓机会性感染的发生[1]，但HAART不能完全清除病毒，且存在治疗费用高、需终身联合服药、毒副作用大及产生耐药突变等缺点[2-3]，所以研究者在不断开发新的治疗手段。RNA干扰(RNA interference，RNAi)技术即是近年来在基因治疗领域中的新进展，在抗肿瘤、抗病毒等方面有较好的应用前景。

    HIV-1vpr基因属于HIV基因组的4个辅助基因之一，编码一个96氨基酸、14 kDa分子量的碱性vpr辅助蛋白，有促进病毒整合前复合物(PIC)的核运输[4]、调节促进宿主基因转录[5]、反式激活HIV长末端重复序列(LTR)及某些异质启动子[6]、诱导宿主细胞G2/M期的停滞[7]、致感染细胞的凋亡[8]、抑制细胞内pre-mRNA的剪接[9]等多项功能 ......