陈砚凝，刘 尧，王小玲，李 芳，刘月平

    ·论著 ·

    蟾蜍令灵对裸鼠食管鳞癌原位移植瘤中P70S6K表达的影响

    陈砚凝，刘 尧，王小玲，李 芳，刘月平

    背景 食管癌是世界上最常见的消化道恶性肿瘤之一，近年研究发现，核糖体蛋白S6激酶(P70S6K)与其发生密切相关。笔者前期的研究表明，蟾蜍令灵(Bufalin)有明显的抗肿瘤作用。目的 探讨Bufalin对裸鼠食管鳞癌原位移植瘤中P70S6K表达的影响。方法 Nu/Nu健康裸鼠36只，雌雄各半，采用随机数字表法分为4组，每组9只，即对照组(0.9%氯化钠溶液)、Bufalin低剂量(0.5 mg/kg，BL)组、Bufalin中剂量(1.0 mg/kg，BM)组、Bufalin高剂量(1.5 mg/kg，BH)组。观察经Bufalin治疗后裸鼠肿瘤生长情况；反转录PCR(RT-PCR)法检测裸鼠原位移植瘤中P70S6K mRNA的表达，Western blotting及免疫组化法检测裸鼠原位移植瘤中P70S6K和p-P70S6K相对表达量。结果 4组治疗前及治疗后第1天裸鼠体质量比较，差异无统计学意义(P>0.05)。4组治疗前肿瘤体积比较，差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后第15天肿瘤体积比较，差异有统计学意义(P0.05)。4组p-P70S6K相对表达量比较，差异有统计学意义(F=233.005，P1 材料与方法

    1.1 实验材料

    1.1.1 细胞株 食管鳞癌细胞株Eca-109由河北医科大学第四医院科研中心提供。

    1.1.2 实验动物 Nu/Nu健康裸鼠36只，雌雄各半，4～6周龄，体质量18～22 g，于北京维通利华实验动物技术有限公司购买，许可证号：SCXK(京)2012-0001，由河北医科大学第四医院实验动物中心专人饲养。

    1.1.3 主要试剂 RPMI 1640培养基(美国Gibco公司)，10%胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)，Bufalin(上海源叶生物技术有限公司)，P70S6K上下游引物〔生工生物工程(上海)股份有限公司〕，兔抗人P70S6K单克隆抗体、兔抗人p-P70S6K单克隆抗体(美国Epitomics公司)，苏木素、伊红(北京中杉金桥生物科技公司)。

    1.1.4 主要仪器 二氧化碳(CO2)培养箱(日本三洋公司)，倒置相差显微镜(日本Nikon公司)，Alpha Innotech紫外凝胶成像系统(美国Alpha公司)，Odyssey双色红外激光成像系统(美国Licor公司) ......