李 勇，檀碧波，范立侨，赵 群，王 冬，刘 羽，刘庆伟

    胃癌发病率近年有所下降，但仍居消化道恶性肿瘤首位。化疗是胃癌综合治疗的主要措施之一，而较强的多药耐药性(MDR)常造成胃癌化疗失败，患者预后较差[1-2]。胃癌MDR的发生机制和逆转研究是目前研究的热点，但尚未取得重要进展。近期microRNA在恶性肿瘤中的作用已成为肿瘤发病机制及治疗的研究热点，有研究发现某些microRNA在胃癌MDR中发挥作用，也有研究显示microRNA-185(miR-185)与肿瘤的增殖、凋亡、侵袭及MDR有关[3-5]，但miR-185与胃癌MDR关系的相关研究报道较少。本研究检测了胃癌细胞株SGC7901和耐阿霉素 (ADR)的细胞株SGC7901/ADR中miR-185表达情况，并应用 miR-185模拟物转染SGC7901/ADR，初步探讨了miR-185参与胃癌MDR的作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 病理资料 选取2014年3—5月于河北医科大学第四医院行胃癌切除术的20例患者胃癌及癌旁组织标本。患者男14例，女6例;年龄36～73岁，平均年龄 (56.6±9.0)岁;术前均经胃内镜病理活检确诊。患者术后TNM分期为ⅡB～ⅢC期，均为中高分化腺癌。患者术前均未接受放化疗等治疗。术中肿瘤切除后取胃癌组织和癌旁组织 (距离肿瘤边缘大于3 cm，术后病理证实无癌细胞存在)各1份，1.0 cm×1.0 cm×0.5 cm，置于液氮中保存，尽快转入-80℃深低温冰箱，用于后续实验。本研究经本院伦理委员会批准，患者均签署知情同意书。

    1.2 细胞株及试剂 人胃腺癌细胞株SGC7901由本院科研中心保种，正常胃上皮细胞株GES-1购自中国科学院上海细胞研究所，细胞株SGC7901/ADR由第四军医大学消化病研究所樊代明院士惠赠。RPMI 1640培养液、胰蛋白酶购自美国Gibco公司;Trizol试剂、脂质体购自美国Invitrogen公司;反转录试剂盒、荧光定量PCR试剂购自美国Promega公司;PCR引物由上海生工生物工程有限公司合成;miR-185模拟物购自美国AB公司;miR-185荧光定量PCR检测试剂盒购自美国GeneCopia公司;蛋白提取试剂盒购自美国Bio-rad公司;MDR1/P-gp、MRP-1、GST-π、LRP及 GAPDH抗体购自美国Santa Cruz公司;MTT试剂购自美国Sigma公司;ADR购自浙江海正药业股份有限公司，10 mg/支;5-氟尿嘧啶 (5-FU)购自西安海欣制药有限公司 ......