王红清，徐佩茹，李 敏，刘新彩，周广花

    肥胖是引发机体发生高血压、心脑血管疾病、糖尿病等多种慢性疾病的主要诱因[1]，尤其是儿童时期的肥胖很有可能延续至成人阶段，而且始于儿童时期的肥胖比成人后肥胖的人群更易患各种慢性疾病[2-3]。因此，儿童肥胖已成为公共卫生领域的研究热点。目前多项研究显示，维生素D水平与肥胖显著相关[4-6]。但关于维生素D受体 (VDR)基因多态性与肥胖的关系国内外研究甚少且结论不一致。本研究对新疆伊犁地区汉族和哈萨克族学龄儿童VDR基因ApaⅠ(A/C)(rs7975232)、BsmⅠ (C/T)(rs1544410)位点多态性进行分析，旨在探讨VDR基因ApaⅠ、BsmⅠ位点多态性与汉族、哈萨克族学龄儿童超重/肥胖的相关性。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 2009年5—6月在新疆伊犁哈萨克自治州各县、市、乡采用整群抽样的方法，抽取8所小学中7～12岁超重/肥胖学龄儿童250例为病例组，其中汉族127例 (女47例，男80例)，哈萨克族123例 (女48例，男75例);选取同时期年龄、性别与病例组匹配的非超重/肥胖健康学龄儿童255例为对照组，其中汉族131例 (女44例，男87例)，哈萨克族124例 (女52例，男72例)。两组均排除由代谢、内分泌、遗传及中枢神经系统等疾病所致肥胖及肥胖综合征。家属均签署知情同意书，本研究得到医院伦理委员会批准。采用体质量低于同年龄、同性别的第85百分位为健康学龄儿童，超过同年龄、同性别的第85百分位为超重/肥胖学龄儿童[7]。

    1.2 研究方法

    1.2.1 基因组DNA提取 按经典酚-氯仿-异戊醇法从血白细胞中提取基因组DNA，用可见紫外分光光度计检测基因组DNA的浓度和纯度，置-20℃冰箱冷冻保存，用作PCR反应模板。

    1.2.2 引物设计与合成 (1)ApaⅠ位点上游引物:5'-AAGGAGAGGCAGCGGTACT-3'，下游引物:5'-CCGGTCAGTCATAGAGG-3'〔由生工生物工程 (上海)股份有限公司合成〕;(2)BsmⅠ位点:参照文献 [8]，上游引物:5'-CAACAAAGACTACAAGTACCGCGTCAGT GA-3'，下游引物:5'-AACCAGCGGAAGAGGTCAAGG G-3'〔由生工生物工程 (上海)股份有限公司合成〕。

    1.2.3 PCR 反应 PCR 25 μl反应体系:模板 DNA 3 μl，重 蒸 水 (ddH2O)8.5 μl，2 × Apa Master MIX 12.5 μl〔生工生物工程 (上海)股份有限公司〕 ......