陈艳霞，杨丽萍，吴险峰，秦晓华，黄 翀，房向东，涂卫平

    ·论著·

    人红细胞生成素对高糖诱导肾近曲小管上皮细胞转分化过程中炎性因子的影响及其可能机制

    陈艳霞，杨丽萍，吴险峰，秦晓华，黄 翀，房向东，涂卫平

    目的 探讨重组人红细胞生成素(rhEPO)对高糖诱导的正常人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)转分化过程中炎性因子的变化及其可能机制。方法 体外培养HK-2细胞，采用随机数字表法分为空白对照组(未加任何刺激物)、高糖诱导组(高糖终浓度为30 mmol/L)、甘露醇对照组(甘露醇为24.5 mmol/L)、rhEPO对照组(rhEPO终浓度为20 U/ml)、不同浓度rhEPO干预组(rhEPO终浓度分别为5、10、20 U/ml+高糖)及Rho激酶抑制剂(Y27632)组(Y27632终浓度为30 μmol/L，加入Y27632 30 min后加高糖，高糖终浓度为30 mmol/L)，以上各组均培养24 h。采用RT-PCR检测各组细胞RhoA mRNA、ROCK1 mRNA表达水平；采用细胞免疫荧光法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平；采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测人纤维连接蛋白(FN)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的蛋白表达水平。结果 各组RhoA mRNA、ROCK1 mRNA表达比较，差异均有统计学意义(P1 材料与方法

    1.1 主要试剂 rhEPO(沈阳三生制药股份有限公司惠赠)，DMEM/F12培养基(美国Hyclone)，0.25%胰蛋白酶(美国Gibco)，高糖，甘露醇，Rho激酶抑制剂Y27632(美国Sigma)，RNA抽提试剂Trizol(美国Invitrogen)，RT-PCR试剂盒(美国Fermentas)，2×EasyTaq PCR SuperMix(北京全式金)，聚合酶链反应引物由Invitrogen合成，鼠抗人单克隆α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)抗体、鼠抗人单克隆E-钙黏蛋白(E-cadherin)抗体、FITC标记抗小鼠IgG(北京中杉金桥)，人纤维连接蛋白(FN)、IL-6、TNF-α定量酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(上海森雄)。

    1.2 主要仪器 核酸微量蛋白测定仪、PCR扩增仪、凝胶成像系统(美国Bio-Rad)，DYPC-31DN型电泳仪(北京市六一仪器厂)，荧光显微镜(日本Olym-pus)，酶标仪(美国Thermo公司)。

    1.3 HK-2细胞培养及实验分组 HK-2细胞株来源于美国ATCC细胞库 ......