周子懿，卢鸿基，向 军，陈依萍，王立新，蔡业峰，蔡定芳

    ·中医·中西医结合研究·

    灯盏生脉胶囊含药血清对神经元缺氧复氧损伤的保护作用及机制研究

    周子懿，卢鸿基，向 军，陈依萍，王立新，蔡业峰，蔡定芳

    目的 从细胞水平探讨灯盏生脉胶囊(DZSM)含药血清对原代大鼠皮质神经元氧糖剥夺/复氧(OGD/R )损伤模型的保护作用及其可能机制。方法 将出生24 h内SD大鼠的皮质神经元原代培养7 d后随机分为空白对照组、OGD模型组、正常血清对照组、低剂量DZSM组、高剂量DZSM组。空白对照组不进行预处理及造模，其他各组在OGD/R前分别采用0.9%氯化钠溶液、正常大鼠血清、低剂量DZSM含药血清、高剂量DZSM含药血清预处理，在OGD/R后24.0 h用光镜观察神经元形态学变化，采用XTT法测定细胞存活率、流式细胞术测定细胞凋亡率、Western blotting测定缝隙连接蛋白43(Cx43)表达量，并观察OGD/R后0.5、6.0、12.0、24.0 h Cx43表达变化。结果OGD/R后24.0 h，OGD模型组神经元呈现损伤特征，细胞存活率〔(54.6±6.4)%〕较空白对照组(100.0%)降低(P1 材料与方法

    1.1 实验动物 清洁级标准健康成年雄性SD大鼠，体质量250～280 g。由复旦大学实验动物中心提供，并饲养于该实验动物中心，自由进食、饮水。动物房12 h明暗交替，平均温度22 ℃，相对湿度30%。按照国际实验动物使用准则对动物进行操作，减少实验动物在实验过程中的痛苦。出生24 h内的SD大鼠由中国科学院上海分院实验动物中心提供。

    1.2 试剂与药品 主要试剂有neurobasal、B-27添加剂、高糖(20.0 mmol/L) DMEM培养液、低糖(0.5 mmol/L) DMEM培养液、胎牛血清(FBS)、青链双抗溶液、L-谷氨酰胺、0.25%胰蛋白酶和磷酸盐缓冲剂(PBS)粉末均为Gibco产品，L-多聚赖氨酸、PI、XTT均为Sigma产品。一抗Connexin43抗体为Cell singaling Technology产品。二抗FITC标记抗鼠IgG来自Jackson Immuno Research Laboratories(Inc.West Grove，USA)。兔抗tubulin多克隆抗体为Chem Icon产品。羊抗兔IgG- FITC 来自上海康成生物工程公司。6孔、96孔培养板购自Corning公司。DZSM来自云南生物谷灯盏花药业有限公司(批准文号：国药准字20026439) ......