刘仁杰，姜华茂，何春秀

    ·论著·

    钩藤碱治疗骶上脊髓损伤致逼尿肌反射亢进大鼠的实验研究

    刘仁杰，姜华茂，何春秀

    目的 探讨钩藤碱对骶上脊髓损伤(SSCI)致神经源性膀胱大鼠逼尿肌反射亢进的治疗作用及其机制。方法 将10周龄健康雌性SD大鼠30只(SPF级)按照随机数字表法分为对照组、模型组、治疗组，每组10只。对照组不做任何手术处理，模型组和治疗组采用脊髓横断法制备神经源性膀胱模型。对照组和模型组腹腔注射0.9%氯化钠溶液，治疗组注射钩藤碱(5 mg/kg)。对照组10只大鼠全部存活，模型组8只造模成功，治疗组8只造模成功。4周后，大鼠膀胱行尿动力学检测，离体逼尿肌条电生理学指标检测，膀胱病理切片HE染色观察，蛋白质印迹法检测c-kit蛋白的表达，激光共聚焦显微镜下观察Cajal间质细胞(ICC)数量变化，实时荧光PCR检测ICC中T型钙通道蛋白亚型α1G基因表达水平。结果 与模型组相比，治疗组膀胱最大容量增大(q=8.251,P1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 主要药品与试剂 钩藤碱(上海齐奥化工科技有限公司，纯度99%)；兔抗鼠c-kit多克隆抗体，兔抗鼠β-actin多克隆抗体，辣根过氧化物酶标记羊抗兔二抗(武汉博士德生物公司)；DAPI细胞染色液(中国碧云天生物技术公司)；多聚甲醛(北京索莱宝科技有限公司)；PVDF膜(瑞士Roche公司)；实时荧光定量PCR试剂盒(美国ABI公司)；Krebs营养液参照规范配置。

    1.1.2 仪器 四通道多功能生理信号放大器，AV1271微量灌注泵(美国3M公司)；Sirius8000尿动力仪(德国WIEST公司)；拉力传感器(北京航空航天研究所)；台式高速冷冻离心机(德国Sigma公司)；TCS SP5型激光共聚焦显微镜(德国Leica公司)；ABI 7300 real-time PCR仪(美国ABI公司)。

    1.1.3 实验动物 10周龄健康雌性SD大鼠30只(SPF级)，购自辽宁医学院实验动物中心，动物合格证号：LY20131022，体质量200～220 g。实验期间正常光照，自由饮食、饮水。

    1.2 方法

    1.2.1 实验分组及大鼠NGB模型制作 将30只大鼠按照随机数字表法分为3组：对照组、模型组、治疗组，每组10只。钩藤碱根据人与大鼠临床用药剂量换算公式，用量每只每天为5 mg/kg，用pH 6.0～6.5的稀盐酸药物溶剂溶解配成所需浓度。对照组不做任何手术处理，模型组和治疗组采用赵雪燕等[6]脊髓横断法制备SSCI导致的NGB模型 ......