周夫群，黄章骞，何 尧

    ·论著·

    bcl-2小分子干扰RNA对人子宫内膜癌RL-952细胞阿霉素敏感性的影响

    周夫群，黄章骞，何 尧

    目的 研究靶向bcl-2小分子干扰RNA(siRNA)干扰序列对人子宫内膜癌RL-952细胞阿霉素(DOX)敏感性的影响及相关作用机制。方法 2014年5—8月，将siRNA干扰序列转染人子宫内膜癌RL-952细胞，设3个实验组：空白对照组、bcl-2 siRNA干扰组(转染bcl-2 siRNA干扰序列)及阴性对照组(转染siRNA空载序列)，检测bcl-2 siRNA干扰组的转染效率和3组bcl-2表达水平。将细胞随机分成5组，分别为空白对照组、阴性对照组(转染siRNA空载序列)、干扰组(转染bcl-2 siRNA干扰序列)、DOX组(加入5 μg/ml DOX)、联合组(转染siRNA干扰序列并加入5 μg/ml DOX)，检测细胞活力、细胞凋亡率、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-9活性及细胞色素C水平。结果 siRNA干扰序列转染人子宫内膜癌RL-952细胞的转染效率为(94.6±12.5)%。3组bcl-2表达水平比较，差异有统计学意义(F=8.75，P1 材料与方法

    1.1 细胞株和试剂 人子宫内膜癌细胞株RL-952购买于中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库。胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)和RPMI 1640培养基购自HyClone公司。DOX购自武汉三洹医药化工有限公司。bcl-2 siRNA干扰序列及转染试剂盒由上海吉凯基因化学技术有限公司设计并合成。细胞裂解液、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-9和细胞色素C活性检测试剂盒均购自南京凯基生物科技发展有限公司。BCA蛋白定量试剂盒、鼠抗人β-actin一抗、鼠抗人bcl-2一抗和羊抗鼠二抗均购自武汉博士德生物工程有限公司。Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡检测试剂盒购自南京凯基生物科技发展有限公司。四甲基氮唑蓝(methylthiaLzolyItetraLzolium，MTT)粉末购自美国Sigma-Aldrich公司。脂质体转染试剂Lipofectamine 2000购自Invitrogen公司。

    1.2 研究方法

    1.2.1 细胞培养 2014年5—8月，人子宫内膜癌RL-952细胞常规培养于含10%FBS的RPMI 1640培养基中，经0.25%胰蛋白酶消化传代后置于37 ℃、饱和湿度、5%CO2培养箱中 ......