陈启鑫，韩冠英，郭 斌，郭跃伟

    ·论著·

    不同浓度硝普钠诱导兔软骨细胞凋亡模型的比较研究

    陈启鑫，韩冠英，郭 斌，郭跃伟

    目的 比较不同浓度硝普钠(SNP)诱导兔软骨细胞凋亡模型，为进一步探讨药物对软骨细胞凋亡的调控作用提供理论支持。方法 2014年9—12月选取4周龄健康雄性新西兰大耳白兔8只，体质量200～250 g，体外分离培养并鉴定兔软骨细胞，采用不同浓度SNP(0、0.062 5、0.125、0.25、0.5、1、2 mmol/L)诱导兔软骨细胞，分别于12、24、48 h采用四甲基偶氮唑盐比色试验法(MTT法)和末端脱氧核苷酸转移的dUTP缺口末端标记法(TUNEL法)评价并比较不同浓度SNP诱导软骨细胞凋亡模型，记录兔软骨细胞增殖情况(OD值)和兔软骨细胞凋亡率。结果 不同浓度SNP诱导的兔软骨细胞在不同时间点的OD值比较，差异均有统计学意义(P1 材料与方法

    1.1 研究材料 2014年9—12月选取4周龄健康雄性新西兰大耳白兔8只，体质量200～250 g，合格证号：Lnyxy20140507,由辽宁医学院动物实验中心提供。实验过程中对动物的处置经辽宁医学院伦理委员会批准。

    1.2 研究试剂 Ⅱ型胶原酶、四甲基偶氮唑盐〔3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT〕、SNP(购自美国Sigma公司)；DMEM/F-12培养基、胎牛血清(FBS)、胰蛋白酶(购自美国Gibco公司)；Alexa 555连接的羊抗兔二抗、4，6-联脒-2-苯基吲哚(4,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)(购自美国Invitrogen公司)；台盼

    本研究背景：

    骨关节炎(osteoarthritis,OA)是以关节软骨基质降解为特征的退行性关节疾病，其发病机制尚不清楚。目前我国OA的患病人数已达到1.5亿左右，是世界上OA患病人数最多的国家之一。OA导致的疼痛和功能障碍将影响患者的生活质量并给家庭和社会带来极大的经济负担。因此，开发有效治疗OA的药物具有很高的社会价值和应用价值。研究表明，药物对OA的疗效与OA的严重程度有关，故选择合适的模型对评价药物对OA的疗效及作用机制的研究具有重要意义。采用硝普钠诱导软骨细胞凋亡模型的方法虽有报道，但硝普钠的剂量和诱导时间各不相同，且对不同浓度硝普钠诱导软骨细胞凋亡的比较研究较少，不利于不同严重程度凋亡模型的建立，进而影响药物对OA的疗效判定及作用机制研究 ......