刘 奔，郭鹏荣，盛玉文，傅德望，王成财，王 朝

    ·中医·中西医结合研究·

    灵芝多糖对荷膀胱癌T24细胞小鼠化疗后腹腔巨噬细胞的影响及相关免疫机制研究

    刘 奔，郭鹏荣，盛玉文，傅德望，王成财，王 朝

    目的 探讨灵芝多糖对荷膀胱癌T24细胞小鼠化疗后腹腔巨噬细胞免疫功能的影响。方法 2012年5月—2014年10月建立荷膀胱癌T24细胞小鼠模型15只，采用随机数字表法分为3组：0.9%氯化钠溶液组、顺铂组、顺铂+灵芝多糖组，每组5只。分别以0.9%氯化钠溶液、0.9%氯化钠溶液、灵芝多糖灌胃18 d，以0.9%氯化钠溶液、顺铂、顺铂腹腔注射5 d。收集小鼠腹腔巨噬细胞，采用流式细胞仪检测腹腔巨噬细胞对异硫氰酸荧光素-右旋糖酐(FITC-dextran)的吞噬能力，以FITC-dexran阳性率表示；采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测腹腔巨噬细胞白介素1(IL-1)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达水平；采用荧光定量PCR(RT-PCR)检测腹腔巨噬细胞IL-1 mRNA和TNF-α mRNA表达水平。结果 顺铂+灵芝多糖组小鼠FITC-dextran阳性率较顺铂组升高4.5%；顺铂+灵芝多糖组小鼠CD11b-FITC阳性率和CD68-FITC阳性率分别较顺铂组升高11.5%和13.4%，但均未能达到0.9%氯化钠溶液组巨噬细胞中阳性率。3组小鼠腹腔巨噬细胞IL-1、TNF-α表达水平及IL-1 mRNA、TNF-α mRNA表达水平比较，差异有统计学意义(P1 材料与方法

    1.1 实验材料 2012年5月—2014年10月，人源膀胱癌T24细胞株购于中科院上海细胞库。Balb/c小鼠15只，4～6周龄，雌性，购于北京华阜康生物科技股份有限公司(动物合格证号：SCXK京2009-0004)。

    1.2 实验药物及试剂 灵芝多糖选用杭州众芝康菇生物技术有限公司生产的灵芝多糖粉，用 0.5%羧甲基纤维素钠溶液溶解，并稀释至实验浓度。顺铂注射液购于山东齐鲁制药有限公司。RPMI 1640培养基(批号：SH30809.01)、胎牛血清(批号：V30087.01)、胰蛋白酶(批号：SH30042.01)均购于美国 hyclone公司。异硫氰酸荧光素-右旋糖酐(FITC-dextran)、IL-1、TNF-α购于美国 Sigma公司。目的基因IL-1和TNF-α引物和内参基因β-actin引物由天根生化科技(北京)有限公司合成。小鼠IL-1定量酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒购于上海森雄科技实业有限公司(进口分装)；RNA酶抑制剂焦碳酸二乙酯(DEPC)(批号：1609-47-8)购于上海思域化工科技有限公司 ......