周君霞

    ·论著·

    Klotho基因多态性在海南黎、汉族冠心病人群中的表达特征研究

    周君霞

    目的 探讨Klotho基因多态性在海南黎、汉族冠心病人群中的表达特征。方法 选取2013年1月—2014年12月在海口市人民医院心内科住院的黎族冠心病患者48例和汉族冠心病患者52例为冠心病组，及同期在该院体检中心进行体检的黎族健康人群50例和汉族健康人群50例为对照组，记录各组性别、年龄、体质指数(BMI)及血压、血脂、血糖水平，检测Klotho基因G395A位点多态性和Klotho蛋白水平。结果 黎族、汉族冠心病组BMI、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)与各自对照组比较，差异均有统计学意义(P0.05)；汉族冠心病组与对照组GG、GA、AA基因型和G、A等位基因分布间差异均有统计学意义(P0.05)；汉族冠心病组与对照组GG、GA、AA蛋白表达水平间差异均有统计学意义(P1 对象与方法

    1.1 研究对象 选取2013年1月—2014年12月在海口市人民医院心内科住院的黎族冠心病患者48例和汉族冠心病患者52例为冠心病组，受试者均经冠状动脉造影证实存在1支及以上冠状动脉狭窄≥50%。另选取同期在该院体检中心进行体检的黎族健康人群50例和汉族健康人群50例为对照组，均无心悸、胸闷、胸痛等冠心病临床表现，心电图、超声心动图等检查显示无缺血性心脏病改变。黎(汉)族判断标准为：祖籍为黎(汉)族且三代以内父母均为黎(汉)族。本研究经过该院伦理委员会批准，受试者均签署知情同意书。

    1.2 资料收集 记录所有受试者性别、年龄、体质指数(BMI)、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)，使用全自动生化分析仪(日立-7600)测定总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、空腹血糖(FPG)等指标。

    1.3 Klotho基因多态性检测

    1.3.1 DNA提取 取外周静脉血2 ml，乙二胺四乙酸二钾(EDTAK2)抗凝，使用人血液基因组DNA抽提试剂盒(大连宝生工程有限公司)操作，方法严格按试剂盒说明书进行。

    1.3.2 等位基因特异引物-聚合酶链反应(ASP-PCR) 使用等位基因ASP-PCR技术检测Klotho基因G395A位点多态性。引物序列设计参照美国国家生物信息中心基因库，使用Primer 5.0 Input软件自行设计G395A位点PCR引物序列。Klotho基因G395A上游引物：5-AATCGGCTCCAGCAAT GTCCAG-3′；下游引物：G等位基因5′-AGAAAAGTCGCCGACCAACTTTC-3′ ......