张 健，李发鹏，甘天翊，许国军，何 卫，周贤惠，汤宝鹏，李耀东，郭 霞

    ·论著·

    心功能不同的风湿性心脏瓣膜病心房颤动患者超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4的表达水平研究

    张 健，李发鹏，甘天翊，许国军，何 卫，周贤惠，汤宝鹏，李耀东，郭 霞

    目的 探讨超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4(HCN4)基因在风湿性心脏瓣膜病心房颤动伴心力衰竭患者与心功能正常的风湿性心脏瓣膜病心房颤动患者心房肌中的表达水平。方法 选取2008—2011年新疆医科大学第一附属医院因心脏瓣膜病需接受开胸换瓣手术患者45例，根据其心功能分级，将美国纽约心脏病协会(NYHA)分级为Ⅱ～Ⅲ级者27例作为试验组，将心功能正常者18例作为对照组。采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和蛋白质免疫印迹法(Western-blotting)分别测定两组患者HCN4 mRNA及蛋白表达水平。结果 对照组HCN4 mRNA表达水平为(1.12±0.69)，低于试验组的(4.91±1.51)(t=0.021，P1 对象与方法

    1.1 研究对象 选取2008—2011年新疆医科大学第一附属医院因心脏瓣膜病需接受开胸换瓣手术患者45例，根据其心功能分级，将NYHA分级为Ⅱ～Ⅲ级者27例作为试验组，将心功能正常者18例作为对照组。其中试验组男15例，女12例；平均年龄(48.6±7.3)岁；左心室射血分数为(35.1±5.0)%；NYHA Ⅱ级者11例，Ⅲ级者16例。对照组男7例，女11例；平均年龄(46.7±6.6)岁；左心室射血分数为(51.8±2.9)%。患者术前均经常规检查排除其他导致心房颤动的疾病，且无电解质紊乱和肝肾功能失代偿等。患者均为慢性心房颤动，持续时间≥6个月。本研究患者均知情同意，本研究获本院医学伦理委员会批准。

    1.2 标本采集及保存 患者接受开胸换瓣手术过程中，在心脏停搏后获取心耳约200 mg，所取样本快速冷冻在液氮中并于-80 ℃保存。

    1.3 实时荧光定量PCR(Real-time PCR) (1)取100 mg左心耳组织，用Trizol(Invitrogen公司)一步法提取总RNA。反转录按照操作说明进行，反应体系如下：在体积为25 μl反转录管中加入2 μg总RNA，5 μl反转录酶M-MLV(美国Promega公司)，5×反应缓冲液5 μl，0.5 μl Oligo(dT)，0.1 mmol/L dNTP，25 μl RNA酶抑制剂，补足RNAase-Free水至25 μl，反应条件为37 ℃ 60 min ......