季 芬，徐玉音，范亚平，王 锋，杨 斌

    ·论著·

    促红细胞生成素对血管紧张素Ⅱ诱导的系膜细胞增殖及Ⅰ/Ⅳ型胶原和纤维连接蛋白表达的影响研究

    季 芬，徐玉音，范亚平，王 锋，杨 斌

    目的 探讨促红细胞生成素(EPO)对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的系膜细胞增殖及Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)和纤维连接蛋白(FN)表达的影响。方法 将体外培养大鼠肾小球系膜细胞分为4组：对照组，AngⅡ组(0.1、1.0、10.0 μmol/L)，EPO组(1、10、100 U/L)，AngⅡ+EPO组(EPO 1、10、100 U/L预处理1 h后加AngⅡ 1.0 μmol/L)。各组处理0、24、48 h时，CCK-8法检测系膜细胞增殖情况，免疫印迹法检测系膜细胞ColⅠ、Col Ⅳ和FN蛋白表达水平，ELISA法检测系膜细胞培养上清液中ColⅠ、Col Ⅳ和FN蛋白水平。结果 单独给予AngⅡ或EPO均可刺激系膜细胞增殖，AngⅡ组亚组和EPO组亚组24、48 h时系膜细胞增殖水平均高于对照组，且48 h时高于24 h时，24 h时高于0 h时，差异均有统计学意义(P0.05)外，AngⅡ组亚组和EPO组其他亚组ColⅠ、Col Ⅳ和FN蛋白表达水平均高于对照组，差异有统计学意义(P1 材料与方法

    1.1 材料 大鼠肾小球系膜细胞株HBZY-1由中国典型培养物保藏中心提供，DMEM培养基购自美国Gibco BRL公司，胎牛血清购自美国Invitrogen公司，胰蛋白酶购自美国Sigma公司，AngⅡ购自美国Enzo公司，EPO购自山东阿华生物药业有限公司，兔抗鼠ColⅠ抗体购自美国Santa Cruz公司，兔抗鼠Col Ⅳ抗体、兔抗鼠FN抗体购自美国Immunoway公司，兔抗鼠β-actin抗体、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG二抗购自上海碧云天生物技术研究所，大鼠ColⅠ、Col Ⅳ及FN ELISA检测试剂盒购自美国R&D公司。

    1.2 细胞培养与分组干预 DMEM培养液(含10%胎牛血清)培养大鼠系膜细胞；待80%融合予无血清培养24 h使细胞同步化后分为4组：对照组，AngⅡ组(0.1、1.0、10.0 μmol/L)，EPO组(1、10、100 U/L) ......