李同妙，徐金升，冯 雨，张胜雷，张俊霞，崔立文，张慧然

    ·论著·

    维拉帕米通过阻断钙离子内流抑制血管平滑肌细胞钙化研究

    李同妙，徐金升，冯 雨，张胜雷，张俊霞，崔立文，张慧然

    目的 探讨维拉帕米抑制高磷诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化的作用及可能机制。方法 2014年12月—2015年6月选取5～8周龄清洁级健康雄性SD大鼠6只，体外分离培养大鼠VSMCs，采用免疫组化法鉴定。将对数期VSMCs随机分为正常对照组〔含10%胎牛血清(FBS)培养基〕、高磷组(高磷培养基，含10 mml/L β-甘油磷酸)、维拉帕米干预组(在高磷培养基的基础上加入维拉帕米至浓度为20 mmol/L)。细胞接受2、4、6 d干预后，检测VSMCs内钙离子水平，采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测VSMCs内目的基因(smad1、runx2 mRNA)表达水平。细胞接受14 d干预后进行钙化检测，包括钙水平测定和茜素红染色情况。结果 高磷组、维拉帕米干预组2、4、6 d后VSMCs内钙离子水平均高于正常对照组(P1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物 2014年12月—2015年6月选取5～8周龄清洁级健康雄性SD大鼠6只，体质量80～100 g，由河北医科大学实验动物中心提供，动物合格证标号：1305090。本研究经河北医科大学第四医院伦理委员会批准。

    1.1.2 主要试剂和仪器 倒置相差显微镜(LH50A型，日本OLYMPUS公司)，酶标仪(CYTATION3型，

    本研究创新点：

    (1)维拉帕米在临床上多用于治疗高血压、动脉粥样硬化等心血管疾病，在血管钙化方面鲜有报道，本研究发现维拉帕米可以抑制血管钙化发生，是本文一大创新点。

    (2)本研究发现，维拉帕米是通过抑制血管平滑肌细胞表型转化来实现其抑制血管钙化作用的。

    (3)维拉帕米在血管钙化方面的作用，可能给临床上治疗血管钙化提供新思路，对于有血管钙化和高血压的慢性肾脏病患者而言，或许合理应用维拉帕米可以同时起到治疗高血压和血管钙化的作用。

    美国BioTek公司)，胎牛血清(FBS，美国GIBCO公司)，DMEM培养基(美国GIBCO公司)，免疫组化试剂盒(河北博海生物工程开发有限公司)，钙水平测定试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司)，二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒(河北博海生物工程开发有限公司)，RNA提取试剂盒、RNA反转录试剂盒(美国Thermo公司)，聚合酶链式反应(PCR)仪(ABI5700型 ......