·中医·中西医结合研究·

    不同证候噎膈患者血清调控食管癌EC9706细胞PI3K/Akt/NF-κB信号通路差异分析

    贾永森，林清，秦丽娟，张艳丽，刘春秋，江春花，闫昕，曹慧娟

    作者单位：063000 河北省唐山市，华北理工大学中医学院(贾永森，林清，江春花，闫昕，曹慧娟)；华北理工大学基础医学院(秦丽娟)；迁安燕山医院(张艳丽)；唐山市人民医院(刘春秋)

    通信作者：秦丽娟，063000 河北省唐山市，华北理工大学基础医学院；E-mail：qinlj20012003@163.com

    【摘要】目的通过研究噎膈血瘀证、脾气虚证患者及健康人血清对食管癌EC9706细胞增殖、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/核因子kappaB(NF-κB)信号通路相关分子mRNA及蛋白表达的调控，探讨噎膈血瘀证、脾气虚证的分子机制。方法本研究于2014年6—12月选择来源于唐山市人民医院、迁安燕山医院肿瘤内科的病理确诊的食管鳞癌患者。按照《中华人民共和国中医药行业标准——中医病症诊断疗效标准》确定噎膈血瘀证或脾气虚证标准，选取血瘀证、脾气虚证患者各10人，另选取健康志愿者10人(来自两院体检人员)。将EC9706细胞于37 ℃，5%饱和湿度的二氧化碳(CO2)培养箱孵育24 h，饥饿24 h，分别加入倍比梯度的噎膈血瘀证、脾气虚证患者和健康人血清，噻唑蓝(MTT)染色法检测细胞增殖变化；实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测PI3K、Akt、NF-kB表达；免疫印迹(Western blot)法检测PI3K/Akt/NF-κB信号通路相关分子蛋白表达。结果血瘀证患者血清刺激细胞的50%增殖率为71.1 μl/ml，脾气虚证为118.0 μl/ml；血瘀证患者血清上调细胞PI3K、Akt和NF-κB mRNA表达水平，与各对照组比较差异有统计学意义(P

    2结果

    2.1人血清对食管癌EC9706细胞增殖的影响将6个不同梯度浓度的人血清加入RPMI1640培养液中孵育细胞，3组血清分别干预的食管癌EC9706细胞均呈增殖趋势。据细胞增殖率得到各组曲线拟合方程如下：血瘀证组Y=-0.928+0.099x+(-1.5×10-5)x2+(-3.3×10-8)x3,PC50=71.1 μl/ml；脾气虚证组Y=-1.525+0.073x+(-2.2×10-5)x2+(-3.3×10-9)x3，PC50=118.0 μl/ml；健康人组Y=0.245+0.04x,PC50=124.3 μl/ml ......