·论著·

    PAX2稳转细胞系构建及对细胞迁移和侵袭能力的作用研究

    李里，宫亮，吴玉斌

    作者单位：121000辽宁省锦州市，辽宁医学院附属第一医院风湿免疫科(李里)，耳鼻喉科(宫亮)；中国医科大学附属盛京医院小儿肾脏风湿免疫科(吴玉斌)

    通信作者：吴玉斌，110004 辽宁省沈阳市，中国医科大学附属盛京医院小儿肾脏风湿免疫科；E-mail：772652284@qq.com

    【摘要】目的 探讨PAX2稳转细胞系构建及生物学作用。方法选择处于对数生长期大鼠肾小管上皮细胞，实验分为稳转组、空载组、对照组。稳转组采用阳离子脂质体转导将pEGFP-PAX2转入大鼠肾小管上皮细胞，空载组采用同样方法配置空载质粒转染溶液，对照组不添加质粒转染溶液。经G418筛选，建立稳定转染细胞系。通过细胞划痕实验及Transwell实验检测PAX2稳转细胞系的细胞迁移率及细胞侵袭作用。结果应用G418筛选14 d，稳转组大鼠肾小管上皮细胞有明显克隆长出，建立PAX2基因稳定转染肾小管上皮细胞系。稳转组在荧光显微镜下可见绿色荧光，基因融合表达获得成功。稳转组细胞PAX2条带密度与β-action吸光度比值为(1.00±0.04)，空载组为(0.83±0.03)，对照组为(0.85±0.04)，3组吸光度比值比较，差异有统计学意义(F=398.7，P

    2结果

    2.1稳定转染细胞系的构建及筛选应用G418筛选14 d，稳转组大鼠肾小管上皮细胞有明显克隆长出，建立了PAX2基因稳定转染肾小管上皮细胞系(见图1)。

    图1 PAX2基因转染肾小管上皮细胞的G418筛选(×200)

    Figure 1G418 selection of renal tubular epithelial cells after PAX2 gene transfection

    2.2稳定转染细胞系鉴定

    2.2.1各组细胞绿色荧光表达稳转组及空载组在荧光显微镜下均可见绿色荧光 ......