祁文瑾，李白鸾，钱 源

    假丝酵母菌性外阴阴道病不同基因型致病菌株药物敏感性比较

    祁文瑾，李白鸾，钱 源

    【摘要】目的对妊娠与非妊娠假丝酵母菌性外阴阴道病(VVC)致病菌株进行基因分型，并初步探讨不同基因型菌株对抗真菌药物是否存在敏感性差异。方法选取2011—2014年在昆明医科大学第一附属医院妇产科门诊就诊的VVC患者373例，其中非妊娠VVC患者197例，妊娠(10～40周)VVC患者176例。以科玛嘉显色培养基和VITEK 2系统鉴定致病菌菌种，采用改良的微量平板稀释法进行克霉唑、制霉菌素和咪康唑的体外药敏实验，特异引物PCR对致病白假丝酵母菌基因分型，并对不同基因型致病菌的体外药敏结果进行比较。结果非妊娠VVC患者检出白假丝酵母菌166株(84.26%)，妊娠VVC患者检出白假丝酵母菌134株(76.14%)，妊娠VVC患者白假丝酵母菌检出率低于非妊娠VVC患者，差异有统计学意义(χ2=3.901，P=0.048)。妊娠与非妊娠VVC患者致病白假丝酵母菌克霉唑、咪康唑最小抑菌浓度(MIC)值均低于非白假丝酵母菌(妊娠：Z克霉唑=6.275，P99.9%)的体外药敏实验，药物终浓度均为0.031 3～16.000 μg/ml[3-4]。

    最小抑菌浓度(MIC)值：以96孔U型细胞培养板进行，菌液最终浓度为(1～5)×103CFU/ml，35 ℃温箱孵育24～48 h观察结果，根据显色指示剂Alamar blue(英国Serotec公司)的颜色变化判别MIC值，质控菌株为克柔假丝酵母菌ATCC 6258和近平滑假丝酵母菌ATCC 22019，购自美国细胞典藏中心。

    1.2.3白假丝酵母菌的基因分型选取经鉴定确认为白假丝酵母菌的菌株，以溶壁酶(Sigma，美国)25 ℃处理24 h破壁[5]，北京庄盟国际生物基因科技有限公司ZP302酵母基因组DNA小量提取试剂盒抽提DNA。基因分型采用特异引物聚合酶链反应(INT-PCR)进行，引物参考文献[5]设计，序列为CA-INT-L(5′-ATAAGGG AAGTCGGCAAAATAGATCCGTAA-3′)，CA-INT-R(5′-CCTTGGCTGTGGTTTCG CTAGATAGTAGAT-3′)，由上海生工生物工程有限公司合成。PCR以25 μl体系进行扩增，含有10×buffer 2.5 μl，MgCl2(25 mmol/L)1.5 μl，dNTP(10 mmol/L)0.25 μl，Taq酶(5 μg/μl)0.25 μl，引物各(100 pmol/μl)0.15 μl ......