杨 眉，蒋春樊，哈春芳

    ·论著·

    雌激素介导骨桥蛋白/基质金属蛋白酶9通路调节子宫内膜异位症腺上皮细胞侵袭性的研究

    杨 眉，蒋春樊，哈春芳

    【摘要】目的探讨子宫内膜异位症腺上皮细胞骨桥蛋白(OPN)与基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达与子宫内膜腺上皮细胞迁移的关系。方法选取2013年8月—2014年3月于宁夏医科大学总医院因“卵巢巧克力囊肿”行剥除术或患侧附件切除术的9例患者异位子宫内膜，同期取行输卵管绝育术的10例患者的正常子宫内膜。子宫内膜组织培养，分离子宫内膜腺上皮细胞。检测子宫内膜异位症及正常子宫内膜OPN、MMP-9蛋白及mRNA表达水平。加入最适宜浓度的17β-雌二醇，培养最适宜时间，检测子宫内膜异位症腺上皮细胞OPN、MMP-9蛋白表达水平。子宫内膜异位症腺上皮细胞分别进行无意义链siRNA转染和siRNA-OPN转染，以无意义链siRNA转染作为对照，检测转染后子宫内膜异位症腺上皮细胞OPN、MMP-9蛋白表达水平。原代培养的子宫内膜腺上皮细胞达到90%融合时，配置成1×106/ml细胞悬液。侵袭小室下室分别加入500 μl的17β-雌二醇(10.0 nmol/L)、siRNA-OPN及无意义链siRNA，培养后在显微镜下取16个固定位置的视野计数穿膜细胞数。结果通过原代培养技术成功分离子宫内膜腺上皮细胞，腺上皮细胞成团生长，呈铺路石样，均在细胞胞质检测到OPN及MMP-9的表达。子宫内膜异位症腺上皮细胞OPN、MMP-9蛋白相对表达量分别为(2.53±0.57)、(3.12±0.69)，高于正常子宫内膜腺上皮细胞，差异有统计学意义(tOPN=-2.310,tMMP-9=-1.375，P

    2结果

    2.1子宫内膜腺上皮细胞鉴定通过原代培养技术成功分离子宫内膜腺上皮细胞，腺上皮细胞成团生长，呈铺路石样。利用上皮来源细胞的标志物广谱角蛋白及间叶来源细胞的标记物波形蛋白，用免疫细胞化学方法进行细胞鉴定。结果显示多数细胞pan-CK染色阳性，而VIMITEN染色阴性(见图1a、1b，本文彩图详见本刊官网www.chinagp.net)，提示得到纯度95%以上的子宫内膜腺上皮细胞。采用免疫细胞化学方法在原代培养的子宫内膜腺上皮细胞中检测到OPN及MMP-9的表达，均主要表达于细胞胞质(见图1c、1d)。 ......