刘玉峰，耿召华，牛丽丽

    ·论著·

    Rad对心肌营养素1诱导心肌细胞肥大作用的实验研究

    刘玉峰，耿召华，牛丽丽

    目的 探讨小G蛋白Rad对心肌营养素1(CT-1)诱导心肌细胞肥大作用的影响。方法 2011年6月—2013年3月，选取新生健康雄性SD乳鼠60只。构建载有Rad基因的腺病毒载体(Ad-Rad)、含有编码绿色荧光蛋白基因的空白腺病毒载体(Ad-GFP)。取乳鼠心脏并剪碎，进行心肌细胞原代培养。采用随机数字表法将提取的原代心肌细胞平均分为6组，即空白对照组〔转染磷酸盐缓冲液(PBS)，刺激物为PBS〕、Ad-GFP组(转染Ad-GFP，刺激物为PBS)、Ad-Rad组(转染Ad-Rad，刺激物为PBS)、CT-1对照组(转染PBS，刺激物为CT-1)、Ad-GFP+CT-1组(转染Ad-GFP，刺激物为CT-1)、Ad-Rad+CT-1组(转染Ad-Rad，刺激物为CT-1)。转染腺病毒载体48 h后，采用流式细胞仪检测腺病毒载体转染率，并采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测Rad、心房钠因子(ANF)、β肌球蛋白重链(β-MHC)mRNA表达水平，Western blotting法检测Rad表达水平。结果 腺病毒载体转染率为95.51%。Ad-Rad组Rad mRNA表达水平高于空白对照组、Ad-GFP组、CT-1对照组、Ad-GFP+CT-1组(P1 材料与方法

    1.1 实验动物 2011年6月—2013年3月，选取新生健康雄性SD乳鼠60只，体质量约20 g，鼠龄1～2 d，由第三军医大学第二附属医院实验动物中心提供(许可证号：SYXK-军2012-0011)。

    1.2 主要试剂及设备 流式细胞仪(Beckman Coulter公司)，高糖DMEM培养基(HyClone公司)，CT-1(Gibico公司)，反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)试剂盒(Takara公司)，Rad抗体(Santa Cruz公司)，荧光显微镜(Olympus公司)，实时荧光定量PCR仪(ABI 7500)。

    1.3 研究方法

    1.3.1 构建缺陷腺病毒载体 构建载有Rad基因的腺病毒载体(Ad-Rad)、含有编码绿色荧光蛋白基因的空白腺病毒载体(Ad-GFP)。

    1.3.2 心肌细胞原代培养 取出新生SD乳鼠心脏并剪碎，采取分步消化法提取心肌细胞悬液，纯化心肌细胞，用含有10%胎牛血清的高糖DMEM培养基置入CO2

    本研究背景：

    Rad是新近发现的小G蛋白 ......