万 强，刘中勇

    ·论著·

    ·中医·中西医结合研究·

    丹参酮ⅡA对脂质运载蛋白2诱导人脐静脉内皮细胞损伤的影响研究

    万 强，刘中勇

    目的 探讨丹参酮ⅡA对脂质运载蛋白2(LCN-2)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用及其与细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)信号转导通路的关系。方法 2015年3—5月将HUVEC分为不同浓度组：分别以0、5、10、20 μmol/L LCN-2作用HUVEC 48 h；不同作用时间组：分别以10 μmol/L LCN-2作用HUVEC 0、12、24、48 h；不同药物干预组：对照组(未做任何处理)、LCN-2组(LCN-2 10 μmol/L刺激48 h)、LCN-2+丹参酮ⅡA组(10 μmol/L丹参酮ⅡA预处理HUVEC 1 h后再加10 μmol/L LCN-2刺激48 h)、LCN-2+PD98059组〔PD98059(终浓度20 μmol/L)预处理HUVEC 30 min后再加10 μmol/L LCN-2刺激48 h〕。采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测细胞增殖〔吸光度(A值)〕，流式细胞术检测细胞凋亡，酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测上清液中白介素6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达水平，Western blotting法检测HUVEC中B淋巴细胞癌2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)表达水平。结果 与0 μmol/L组和5 μmol/L组比较，10 μmol/L组、20 μmol/L组A值、Bcl-2表达水平下降，细胞凋亡率、IL-6、MCP-1、Bax、p-ERK1/2表达水平升高(P1 材料与方法

    1.1 细胞与主要试剂 2015年3—5月，HUVEC购于Cascade Biologics公司，丹参酮ⅡA(纯度≥98%)、二甲基亚砜(DMSO)购于美国Sigma公司，胎牛血清购于杭州四季青生物工程材料有限公司，DMEM培养基购于美国Gibco公司，LCN-2购于美国Acrobiosystems公司，PD98059购于美国Tocris Bioscience公司，Annexin V-FITC试剂盒购于美国Bio Vision公司，白介素6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒购于美国eBioscience公司，B淋巴细胞癌2(Bcl-2)抗体、Bcl-2相关X蛋白(Bax)抗体、磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)抗体购于美国Cell Signal Technology公司 ......