唐仕军，赵 冬，朱立仓，李晓天，朱文学，杨 鹏，王业忠

    832000新疆石河子市，石河子大学医学院第一附属医院神经外科

    ·论著·

    氨基胍对氧-糖剥夺大鼠皮质神经元一氧化氮及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的影响研究

    唐仕军，赵 冬，朱立仓，李晓天，朱文学，杨 鹏，王业忠

    832000新疆石河子市，石河子大学医学院第一附属医院神经外科

    【摘要】目的探讨氨基胍对氧-糖剥夺大鼠皮质神经元一氧化氮(NO)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达的影响。方法2014年11月—2015年7月选取新生24 h内SD大鼠12只，分离及培养大鼠皮质神经元，取原代培养8 d的皮质神经元，分为3组：正常对照组、氧-糖剥夺组、氨基胍组。正常对照组皮质神经元采用Neurobasal培养液+2%B27培养液添加剂培养，氧-糖剥夺组皮质神经元缺氧、缺糖处理45 min后，换Neurobasal培养液+2%B27培养液添加剂培养；氨基胍组皮质神经元缺氧、缺糖处理45 min后，换Neurobasal培养液+2%B27培养液添加剂培养的同时加入终浓度为10 mmol/L的氨基胍溶液。各组培养2、6、12 h,采用硝酸还原法检测细胞上清液中NO表达水平，采用Western blotting法检测Caspase-3表达水平。结果各组培养2、6、12 h时细胞上清液中NO、Caspase-3表达水平比较，差异均有统计学意义(P

    2结果

    2.1皮质神经元形态学观察皮质神经元接种时形态小，透亮，呈圆形，单个散在分布(见图1A，本文图1、2彩图见本刊官网www.chinagp.net电子期刊相应文章附件)。皮质神经元接种后有少量皮质神经元开始贴壁，2h左右皮质神经元贴壁较多，少量皮质神经元伸出短小的突起，4h左右皮质神经元已基本贴壁，大量皮质神经元伸出突起，周围光晕明显。3d时皮质神经元突起明显伸长，相互交织，皮质神经元透亮，立体感强，呈圆形、椭圆形、梭形(见图1B)。5～6d时皮质神经元细胞体增大，突起交织成网状(见图1C)。7～8d时，皮质神经元细胞体饱满，细胞质透亮，细胞核大而明显，细胞体周围折光性强，立体感好，突起交织成致密的网状结构(见图1D)。

    2.2免疫荧光双重染色法鉴定皮质神经元培养8d的皮质神经元，经NSE和PI染液免疫荧光双标染色呈强阳性，激光共聚焦显微镜下观察，细胞质和轴突被染成绿色且细胞核被染成红色的为皮质神经元，细胞核被染成红色而细胞质无染色的为非皮质神经元。经鉴定此分离培养的是皮质神经元 ......