张 源，王 丽，张 慧，马依彤，杨毅宁，马苗苗，朱晓丽

    ·论著·

    建立β3肾上腺素能受体过表达的心肌成纤维细胞模型方法的比较

    张 源，王 丽，张 慧，马依彤，杨毅宁，马苗苗，朱晓丽

    【摘要】目的用两种不同的方法构建β3肾上腺素能受体(β3-AR)过表达的SD乳鼠心肌成纤维细胞(CFBs)模型，并对两种方法的效果进行比较，为今后在细胞水平观察β3-AR对心功能，尤其是对慢性心力衰竭(CHF)的影响提供新的实验方法。方法2015年3—6月，选取出生1～3 d的SFP级SD乳鼠8只。分离SD乳鼠CFBs并体外培养，随机分为3个感染复数(MOI)组，分别为MOI 50组、MOI 100组、MOI 200组，采用β3-AR基因过表达的慢病毒载体感染CFBs，利用流式细胞仪检测感染率，确定最佳MOI。将SD乳鼠CFBs随机分为4个β3-AR激动剂干预组，分别为正常对照组、10-6mol/L组、10-5mol/L组、10-4mol/L组，采用不同浓度β3-AR激动剂干预CFBs，利用Western blotting法检测β3-AR表达水平，挑选出β3-AR激动剂干预CFBs的最适浓度。结果普通光学显微镜下观察CFBs，无搏动性，大多数呈梭形，其细胞核较大，胞质透明。倒置荧光显微镜下观察感染24、48、72、96 h时CFBs状态及荧光表达情况，感染72 h时，各MOI组CFBs生长状态较好，细胞大多数呈梭形，无搏动性，细胞核较大，且肉眼观察荧光表达最佳。MOI 100组、MOI 200组感染率高于MOI 50组(P

    2结果

    2.1CFBs形态普通光学显微镜下观察CFBs，无搏动性，大多数呈梭形，其细胞核较大，胞质透明(见图1)。

    图1 普通光学显微镜下第2代心肌成纤维细胞(×200)

    Figure1Thesecondgenerationofcardiacfibroblastsobservedunderordinaryopticsmicroscope

    2.2CFBs状态及荧光表达情况倒置荧光显微镜下观察感染24、48、72、96 h时CFBs状态及荧光表达情况：感染24 h时，各MOI组细胞较稀疏，部分形态还未完全变为梭形，荧光表达不显著；感染48 h时，各MOI组荧光表达较感染24 h时有所增加 ......