符黄德，罗起胜，邓元央，黄华东，罗琨祥，李传玉，韦传东，陈源红，黄海能

    ·论著·

    肝癌衍生生长因子和血管内皮生长因子在脑胶质瘤中的表达及其与肿瘤微血管密度的相关性研究

    符黄德，罗起胜，邓元央，黄华东，罗琨祥，李传玉，韦传东，陈源红，黄海能

    533000广西百色市，右江民族医学院附属医院神经外科(符黄德，罗起胜，邓元央，黄华东，罗琨祥，李传玉，黄海能)，检验科(韦传东)；右江民族医学院基础医学院医学微生物和免疫教研室(陈源红)

    【摘要】目的探讨肝癌衍生生长因子(HDGF)和血管内皮生长因子(VEGF)在脑胶质瘤中的表达及其与肿瘤微血管密度(MVD)的相关性。方法选取2008年3月—2013年6月于右江民族医学院附属医院诊治的脑胶质瘤患者52例为脑胶质瘤组，另选取同期于本院行颅脑损伤内减压术患者52例为对照组。收集脑胶质瘤组肿瘤组织和对照组正常脑组织，冷冻保存。实时荧光定量反转录PCR法测定HDGF、VEGF mRNA表达水平。将肿瘤组织和正常脑组织裂解后提取蛋白，分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blotting测定HDGF、VEGF表达水平。以CD105作为血管内皮细胞的特异性标志物，显微镜下观察5个视野内微血管数计算MVD。自病理检查确诊起，追踪随访观察脑胶质瘤患者至2015-07-30，随访终点为死亡。结果脑胶质瘤组HDGF、VEGF mRNA表达水平高于对照组，经ELISA、Western blotting测定的HDGF、VEGF表达水平均高于对照组，差异有统计学意义(P70分，近1.0个月内未接受过任何抗肿瘤治疗；(6)预计生存时间>3.0个月。另选取同期于本院行颅脑损伤内减压术患者52例为对照组，并排除患有其他可能影响HDGF、VEGF表达水平的血管系统肿瘤者。患者及家属均知情同意本研究，签署知情同意书，研究方案亦通过本院伦理委员会批准。

    1.2方法

    1.2.1标本采集将脑胶质瘤组肿瘤组织和对照组正常脑组织标本取出后，部分组织迅速置于液氮中冷冻，随后置于-80 ℃冰箱保存，用于实时荧光定量反转录PCR、酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blotting检测；余组织采用10%甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，切片，用于肿瘤微血管密度(MVD)的观察。

    1.2.2实时荧光定量反转录PCR

    1.2.2.1主要仪器和试剂总RNA提取试剂盒由南京凯基生物科技发展有限公司生产(批号KGA1203)；TaKaRa反转录和荧光定量PCR扩增试剂盒均购于宝生物工程(大连)有限公司(批号D6110A和DRR081A)；荧光定量PCR仪由美国Thermo Fisher公司生产 ......