张先锋，黄远见，肖 娟，张志伟，黄卫国

    ·论著·

    miR-150促进鼻咽癌细胞增殖和侵袭的机制研究

    张先锋，黄远见，肖 娟，张志伟，黄卫国

    目的探讨miR-150是否通过靶向调控程序性细胞死亡因子4(PDCD4)促进鼻咽癌细胞增殖和侵袭，进一步揭示miR-150在鼻咽癌中的癌基因作用。方法2014年3—6月，培养鼻咽癌细胞株CNE-2，取生长良好的CNE-2用于实验。设计合成PDCD4野生型引物序列以及突变型引物序列，连接到含有荧光素酶载体质粒上，检测荧光素酶活性。分别瞬时转染Vector、pcDNA3.1(+)-PDCD4、miR-ctr、miR-150 mimics联合pcDNA3.1(+)-PDCD4于CNE-2，48 h后采用Western blotting法检测PDCD4表达水平。分别瞬时转染Vector、pcDNA3.1(+)-PDCD4、miR-150 inhibitors、miR-150 mimics联合pcDNA3.1(+)-PDCD4于CNE-2，分别于培养24、48、72、96 h后测定其吸光度(OD)值，反映其增殖能力。分别瞬时转染Vector、pcDNA3.1(+)-PDCD4、miR-150 inhibitors、miR-150 mimics联合pcDNA3.1(+)-PDCD4于CNE-2，采用Transwell侵袭实验检测CNE-2侵袭能力。结果无miR-150转染的PDCD4野生型细胞株荧光素酶活性为(0.975±0.112)，miR-150转染的PDCD4野生型细胞株荧光素酶活性为(0.588±0.042)，差异有统计学意义(t=7.853,P=0.018)。无miR-150转染的PDCD4突变型细胞株荧光素酶活性为(0.992±0.135)，miR-150转染的PDCD4突变型细胞株荧光素酶活性为(0.875±0.095)，差异无统计学意义(t=1.461,P=0.281)。转染Vector、pcDNA3.1(+)-PDCD4、miR-ctr、miR-150 mimics联合pcDNA3.1(+)-PDCD4的CNE-2 PDCD4表达水平分别为(0.655±0.058)、(1.147±0.152)、(0.704±0.068)、(0.313±0.036)，差异有统计学意义(F=43.410，P1 材料与方法

    1.1主要材料低分化鼻咽癌细胞株CNE-2购于上海细胞研究所，由南华大学肿瘤研究所保存。荧光素酶活性检测试剂盒购自美国Promega公司；miR-150 mimics、miR-150 inhibitors购自上海拜力生物科技有限公司；PDCD4单克隆抗体、β-actin抗体购自美国Epigentek公司 ......