赵丽敏，况红艳，张罗献，吴纪珍，陈献亮，张晓宇，马利军

    ·论著·

    瞬时受体电位香草酸亚型1通道影响支气管哮喘大鼠气管平滑肌细胞增殖和炎症的研究

    赵丽敏，况红艳，张罗献，吴纪珍，陈献亮，张晓宇，马利军

    目的探讨瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)通道对支气管哮喘大鼠气管平滑肌细胞增殖和炎症的影响。方法2013年6月—2014年6月，选取5～6周龄清洁级健康雄性SD大鼠60只，采用随机数字表法分为：正常对照组、支气管哮喘组、支气管哮喘+辣椒素(CAP)组、支气管哮喘+辣椒卓平(CPZ)组，每组15只。支气管哮喘组、支气管哮喘+CAP组、支气管哮喘+CPZ组大鼠制作支气管哮喘模型，支气管哮喘+CAP组大鼠给予含有0.01% CAP的饲料喂养，支气管哮喘+CPZ组大鼠给予含有0.01% CPZ的饲料喂养。病理学检查显微镜下找到完整肺内支气管横断面，计算管壁面积(WA)/管腔内周长(Pi)、支气管平滑肌面积(S)/Pi、支气管平滑肌细胞核数(N)/Pi，采用实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)和Western blotting法检测气管平滑肌组织TRPV1、增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA及其蛋白表达水平，酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大鼠气管平滑肌组织白介素(IL)-4、IL-5、IL-13表达水平。结果支气管哮喘组和支气管哮喘+CAP组大鼠气管WA/Pi、S/Pi、N/Pi高于对照组(P1 材料与方法

    1.1主要试剂与仪器TRIZOL试剂购于Gibco公司；Omniscript反转录酶、TRPV1引物(QT00193907)、内参β-actin引物(QT00193473)、聚合酶链式反应(PCR)试剂盒、SYBR GreenⅠ购于Qiagen(Valencia，CA)；Taq酶购于Promega公司；TRPV1兔多抗(ab63083)、内参β-actin引物(ab75186)、羊抗兔辣根过氧化物酶(HRP)标记二抗(ab97069)购于Abcam公司(英国)；增殖细胞核抗原(PCNA)兔多抗(sc-7907)购于Santa Cruz公司(美国)；卵清蛋白(OVA)、辣椒素(capsaicin，CAP)、辣椒卓平(capsazepin，CPZ)购于Sigma公司(美国)；酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒购于Invitrogen公司(美国)；含苯甲基磺酰氟(PMSF)的RIPA裂解液、BCA蛋白检测试剂盒购于武汉博士德生物工程有限公司。

    主要仪器有定量荧光分光光度计(Spex AR-CM-MIC)、Bio-Rad PCR仪、Kodak Image station成像系统(美国)、Bio-Rad Mini V垂直电泳仪(GE公司)、Trans Blot仪(GE公司)、酶标仪(Bio-tek ELX800)等 ......