刘绍晨，吴晓光，杨 岚，李义学，仇志富

    ·论著·

    ·中医·中西医结合研究·

    补阳还五汤对脑出血大鼠脑组织水通道蛋白4表达及血-脑脊液屏障通透性的影响研究

    刘绍晨，吴晓光，杨 岚，李义学，仇志富

    目的探讨补阳还五汤对脑出血大鼠脑组织水通道蛋白4(AQP4)表达及血-脑脊液屏障通透性的影响。方法2014年3月—2015年11月，采用随机数字表法将成年雄性SPF级SD大鼠分为假手术组、模型组、补阳还五汤低剂量组、补阳还五汤中剂量组、补阳还五汤高剂量组，各24只。其中模型组、补阳还五汤各剂量组制备脑出血模型。造模后第2天起，补阳还五汤低剂量组、补阳还五汤中剂量组、补阳还五汤高剂量组灌胃补阳还五汤，药量分别为13.2、26.5、53.0 g·kg-1·d-1，连续给药14 d，假手术组及模型组给予等体积的0.9%氯化钠溶液。免疫组织化学法检测磷酸化肌醇磷脂3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)表达水平，免疫荧光标记法检测AQP4表达水平，干湿重法检测脑组织含水量，甲酰胺法检测血-脑脊液屏障通透性〔以依文思蓝(EB)含量表示〕。结果假手术组、模型组、补阳还五汤低剂量组、补阳还五汤中剂量组、补阳还五汤高剂量组PI3K、AKT表达水平比较，差异均有统计学意义(P1 材料与方法

    1.1实验动物成年雄性SPF级SD大鼠120只，体质量230～250 g(北京维通利华实验动物技术有限公司)。大鼠采用随机数字表法分成假手术组、模型组、补阳还五汤低剂量组、补阳还五汤中剂量组、补阳还五汤高剂量组，每组24只。大鼠在室温26～28 ℃环境下饲养，自由进食进水，自然光照。

    1.2实验药品及试剂补阳还五汤由生黄芪120.0 g、当归尾6.0 g、赤芍4.5 g、川芎4.5 g、干地龙3.0 g、桃仁3.0 g、红花3.0 g组成，购自承德大药房，通过水煎醇沉法制备成浓度为5.3 g/ml的水煎醇沉物。兔抗大鼠PI3K、AKT多克隆抗体购自武汉博士德生物科技有限公司；兔抗大鼠AQP4单克隆抗体购自Abcam公司；其他试剂为国产分析纯。1.3动物模型制备及给药2014年3月—2015年11月在承德医学院基础医学研究所完成本实验，参照LIEW等[2]方法制备大鼠脑出血模型，SD大鼠经腹腔注射10%水合氯醛溶液麻醉后，取俯卧位固定于鼠脑立体定位仪上，局部消毒后，切开大鼠皮肤，使其暴露颅骨，进行钻孔，在大鼠的前囱后方约1.4 mm，右旁开约3.2 mm处垂直进针，进针深度约为5.6 mm，可在近内囊的苍白球内进行定位 ......