黄盈瑞，陈 洁，周玲玲，梁 勇

    ·论著·

    甲状腺乳头状癌组织中Smad4基因表达水平及其意义研究

    黄盈瑞，陈 洁，周玲玲，梁 勇

    目的 探讨Smad4基因在甲状腺乳头状癌组织中的表达水平及其意义。方法 选取2013年1—8月台州学院附属医院肿瘤外科收治的甲状腺乳头状癌患者20例作为甲状腺乳头状癌组，另选取同期本院收治的行结节性甲状腺肿手术患者20例作为对照组。收集甲状腺乳头状癌组甲状腺乳头状癌手术切除组织，对照组结节性甲状腺肿手术中腺肿旁正常组织。采用免疫组织化学检测两组Smad4阳性表达率；Western blotting法检测两组Smad4表达水平；实时荧光定量PCR法检测两组Smad4 mRNA表达水平。结果 甲状腺乳头状癌组Smad4阳性表达率为35.0%(7/20)，低于对照组的90.0%(18/20)(χ2=10.667，P=0.001)。不同性别、年龄、肿瘤直径、淋巴结转移、临床分期的甲状腺乳头状癌患者Smad4阳性表达率比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。甲状腺乳头状癌组Smad4表达水平为(0.352±0.012)，低于对照组的(0.722±0.007)(t=46.130，P1 资料与方法

    1.1 一般资料 选取2013年1—8月台州学院附属医院肿瘤外科收治的甲状腺乳头状癌患者20例作为甲状腺乳头状癌组，其中男3例，女17例；年龄21～59岁，平均年龄(44.6±7.2)岁，1.0 cm者17例；伴淋巴结转移6例，无淋巴结转移14例；临床分期Ⅰ～Ⅱ期13例，Ⅲ～Ⅳ期7例；患者术前均未行放疗或化疗，术后经病理科切片明确诊断为甲状腺乳头状癌。另选取同期本院收治的行结节性甲状腺肿手术患者20例作为对照组，其中男5例，女15例；年龄23～65岁，平均年龄(42.3±11.4)岁。

    1.2 方法 收集两组患者的组织标本，其中甲状腺乳头状癌组标本来源于甲状腺乳头状癌手术切除组织，对照组标本来源于结节性甲状腺肿手术中腺肿旁正常组织；每份标本取其中一半置于4%甲醛溶液中固定，常规脱水石蜡包埋，用于免疫组织化学检测；标本其余部分提取蛋白质用于Western blotting检测，提取RNA用于实时荧光定量PCR检测。

    1.2.1 免疫组织化学法检测Smad4阳性表达率 切片常规脱水脱蜡处理，磷酸盐缓冲液(PBS)清洗后用3%去离子水孵育，枸橼酸钠3 g+枸橼酸0.4 g配水1 000 ml高压抗原修复，清洗擦干后10%山羊血清封闭，滴加一抗Smad4(Santa Cruz公司 ......