魏艳青，马路平，王江平，钱 彪，王勤章

    ·论著·

    经尿道灌注干细胞白血病基因慢病毒转染豚鼠糖尿病膀胱病变的效果研究

    魏艳青，马路平，王江平，钱 彪，王勤章

    目的 制备糖尿病膀胱病变(DCP)豚鼠模型，经尿道灌注干细胞白血病(SCL)基因慢病毒，观察其转染效果及稳定性。方法 2014年11月—2015年6月，采用随机数字表法在75只普通级荷兰种雄性豚鼠中选取60只单次腹腔注射链脲佐菌素(200 mg/kg)，常规饲养6周后按血糖水平>11.1 mmol/L筛选糖尿病模型，再常规饲养4周后通过尿流动力学检测仪筛选DCP模型；另15只作为对照组，单次注射配制的链脲佐菌素缓冲液，饲养时间相同。采用随机数字表法从成功造模的DCP模型中选取15只后，再采用随机数字表法分为Ⅰ组(3只)和实验组(12只)，Ⅰ组不予处理，实验组经尿道分2次灌注SCL基因慢病毒(1.6×107TU)，于2次灌注结束后第2、7、14、28天分别采用颈椎脱臼法处死实验组豚鼠3只，记为Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组，Ⅰ组与Ⅱ组一同处死，取膀胱组织冷冻于液氮中，甘油封固后激光共聚焦显微镜下观察组织中绿色荧光分布情况。采用qRT-PCR检测SCL mRNA表达水平。结果 DCP模型造模过程中，糖尿病模型筛选时弃去18只，尿流动力学检测仪筛选时弃去19只，最终得到DCP模型豚鼠23只，记为DCP模型组。DCP模型组豚鼠最大逼尿肌压低于对照组，最大膀胱容量大于对照组(P1 材料与方法

    1.1 实验动物及材料

    1.1.1 实验动物 普通级荷兰种雄性豚鼠75只，体质量400～450 g，2月龄，购自新疆医科大学动物实验中心。

    1.1.2 实验材料 链脲佐菌素(北京索莱宝科技有限公司)，尿流动力学检测仪(Laborie公司)，SCL基因慢病毒(上海吉凯基因化学技术有限公司)，豚鼠用尿管由麻醉用硬膜外导管改良制成，冷冻切片(ICIROM325，德国)由石河子大学第一附属医院病理科协助完成，荧光观察部分在石河子大学教育部重点实验室激光共聚焦显微镜(Leica TCSSP5，德国)下完成，Trizol(Invitrogen)，高速离心机、反转录试剂盒、PCR仪PE7500 FAST(ABI 公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 DCP模型制备 2014年11月—2015年6月，采用随机数字表法在75只豚鼠中选取60只单次腹腔注射链脲佐菌素(200 mg/kg)，常规饲养6周后按血糖水平>11.1 mmol/L筛选糖尿病模型，不符合要求或死亡的豚鼠弃去；再常规饲养4周后通过尿流动力学检测仪筛选DCP模型 ......