柯 本，陈艳霞，吴险峰，黄 翀，秦晓华，房向东，涂卫平

    ·论著·

    他克莫司对高糖诱导人肾小管上皮细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制研究

    柯 本，陈艳霞，吴险峰，黄 翀，秦晓华，房向东，涂卫平

    目的 探讨他克莫司(FK506)对高糖诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)增殖、凋亡及其表达相关炎性因子的影响。方法 于2014年10月—2015年5月，以人HK-2为研究对象，分为空白对照组、高糖诱导组(30 mmol/L高糖)、甘露醇组(24.5 mmol/L甘露醇)、20 μmol/L FK506对照组、不同浓度FK506干预组(30 mmol/L高糖+1、5、10、20 μmol/L FK506)及核因子(NF)-κB信号通路抑制剂组(30 μmol/L Bay11-7082+30 mmol/L高糖)，各组均培养24 h。应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测各组HK-2 NF-κB mRNA的表达；酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达；CCK-8法测定细胞增殖；流式细胞技术检测细胞凋亡。结果 各组NF-κB mRNA表达水平比较，差异有统计学意义(P1 材料与方法

    1.1 主要试剂 他克莫司〔安斯泰来制药有限公司(J20140942，1 mg/片)〕，高糖、甘露醇(美国Sigma)，NF-κB信号通路抑制剂Bay11-7082(美国Santa Cruz公司)，DMEM 1640培养基(美国Hyclone公司)，胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)，0.25%胰蛋白酶(美国Gibco公司)，RNA抽提试剂Trizol〔天根生化科技(北京)有限公司〕，反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)试剂盒(日本Takara公司)，2×Easy Taq PCR SuperMix(北京全式金生物技术有限公司)，聚合酶链式反应(PCR)引物由上海英骏生物技术有限公司合成，CCK-8试剂盒(北京赛驰生物科技有限公司)，人IL-6及TNF-α定量酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(武汉优尔生科技股份有限公司)，流式细胞凋亡检测试剂盒(凯基生物科技发展有限公司)。

    1.2 主要仪器 核酸微量蛋白测定仪、PCR扩增仪、凝胶图像成像系统(美国Bio-Rad)，DYPC-31DN型电泳仪(北京市六一仪器厂)，酶标仪(美国Thermo公司)，流式细胞仪(美国Beckman)。

    1.3 HK-2培养及实验分组 于2014年10月—2015年5月，HK-2购自上海中科院细胞库 ......