高海祥，曹 磊

    ·论著·

    miR-200c增加H2228细胞对克唑替尼和紫杉醇及顺铂敏感性的研究

    高海祥，曹 磊

    背景 miR-200c可以增加肿瘤细胞对紫杉醇、顺铂的敏感性及表皮生长因子受体(EGFR)阳性肺癌细胞对分子靶向药物厄洛替尼、吉非替尼及阿法替尼的敏感性，但其是否可以增加棘皮动物微管相关样蛋白4(EML4)-间变性淋巴瘤激酶(ALK)融合基因阳性肺腺癌细胞(ALK阳性肺癌细胞)对克唑替尼、紫杉醇和顺铂的敏感性尚无相关研究。目的 观察miR-200c是否可以增加H2228细胞对克唑替尼、紫杉醇及顺铂的敏感性，并探讨其机制。方法 2014年2月—2015年5月，培养H2228细胞并进行转染，根据转染物的不同，将细胞分为增强转染组(转染miR-200c mimics)、增强对照组(转染miR-200c mimics阴性对照)、抑制转染组(转染miR-200c inhibitor)、抑制对照组(转染miR-200c inhibitor阴性对照)。采用实时荧光定量PCR法(Real-time PCR法)检测H2228细胞中miR-200c基因表达水平，MTT法检测不同浓度抗肿瘤药物〔克唑替尼(50、100、200 nmol/L)、紫杉醇(6.25、12.50、25.00 nmol/L)、顺铂(25、50、100 nmol/L)〕作用下H2228细胞增殖水平，Transwell法检测H2228细胞迁移率，Real-time PCR法检测增强转染组、增强对照组H2228细胞中E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、波状蛋白、CD24mRNA表达水平，Western blotting法检测增强转染组、增强对照组H2228细胞中E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、波状蛋白、CD24表达水平。结果 增强转染组H2228细胞中miR-200c基因表达水平高于增强对照组(P1 材料与方法

    1.1 实验材料 H2228细胞株为ALK阳性肺癌细胞，购于ATCC(American Type Culture Collection)公司。

    1.2 主要试剂及仪器 ALK抑制剂克唑替尼购自美国Sigma-Aldrich公司；miR-200c mimics、miR-200c inhibitor及相应阴性对照购自美国invitrogen公司；RPMI 1640培养基、胎牛血清、胰蛋白酶以及MTT溶液购自美国Gibco公司；鼠抗人E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、波状蛋白、CD24单克隆抗体购自美国Abcam公司；辣根过氧化物酶(HRP)标记抗鼠和兔的二抗购自美国Fementas公司 ......