童卫泉，杨宏宽，夏婷婷，刘贤忠，陈 彬，陈 芳

    ·论著·

    雷帕霉素对慢性阻塞性肺疾病大鼠气道重塑中血管内皮生长因子表达作用的研究

    童卫泉，杨宏宽，夏婷婷，刘贤忠，陈 彬，陈 芳

    目的 探讨雷帕霉素对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道重塑中血管内皮生长因子(VEGF)表达的作用。方法 2015年6月—2016年3月，采用随机数字表法将30只SPF级健康雄性Wistar大鼠分为正常组、模型组、雷帕霉素组，每组10只。模型组与雷帕霉素组采用气道内滴入脂多糖(LPS)加烟熏双重刺激法建立COPD气道重塑大鼠模型，正常组不予任何干预。雷帕霉素组给予雷帕霉素治疗，模型组、正常组给予等量的0.9%氯化钠溶液。干预治疗14 d后，收集各组大鼠血清、肺泡灌洗液(BALF)、肺组织标本；取部分右侧肺组织行HE染色，剩余右侧肺组织行Masson染色与免疫组化染色，分别计算小气道基底膜单位长度的胶原厚度(WAc/Pbm)、细支气管VEGF阳性表达面积占气管管壁总面积的百分比(Aim/WAt)；采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测血清、BALF及肺组织中VEGF水平。结果 HE染色结果显示，与模型组比较，雷帕霉素组大鼠细支气管、肌性动脉形态及肺组织病理改变有所改善；Masson染色结果显示，模型组、雷帕霉素组大鼠WAc/Pbm大于正常组，雷帕霉素组大鼠WAc/Pbm小于模型组(P1 材料与方法

    1.1 实验动物与分组 SPF级健康雄性Wistar大鼠30只，体质量(200±20)g，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，生产许可证号SCXK(沪)：2012-0002，由浙江中医药大学动物实验中心饲养。采用随机数字表法将大鼠分为正常组、模型组、雷帕霉素组，每组10只。本研究经浙江中医药大学动物实验伦理委员会审批通过。

    1.2 实验药物 雷帕霉素购于美国Sigma公司。

    1.3 实验试剂 雄狮牌香烟购于浙江中烟工业有限责任公司(焦油量8 mg/支，烟气烟碱量0.7 mg/支，一氧化碳量10 mg/支)；LPS购于美国Sigma公司；酶联免疫吸附实验(ELISA)试剂盒购于武汉新启迪生物科技有限公司；免疫组化VEGF检测试剂盒购于丹麦DAKO公司。

    1.4 方法

    1.4.1 建立COPD气道重塑大鼠模型 2015年6月—2016年3月，采用气道内滴入LPS加烟熏双重刺激法建立COPD气道重塑大鼠模型，即模型组与雷帕霉素组在第1天与第28天气道内滴入LPS，除当日不予烟熏外，余时间在自制烟熏箱内烟熏24周 ......